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南瓜蛋白及STI571体外联合抗K562细胞作用
南瓜蛋白及STI571体外联合抗K562细胞作用
【摘要】 目的 探讨南瓜蛋白与STI571对K562细胞增殖的抑制作用及其机制。 方法 用MTT检测南瓜蛋白与STI571单用或联合作用对K562细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测药物对细胞的凋亡率;Western blot检测药物对p210Bcr-Abl蛋白的影响。 结果 南瓜蛋白与STI571联合作用协同抑制K562细胞增殖(qgt;1.15);协同诱导K562细胞凋亡;协同抑制p210Bcr-Abl蛋白表达。 结论 南瓜蛋白与STI571联合作用体外协同抗K562细胞的增殖。
【关键词】 南瓜; K562细胞; 植物蛋白类; 受体蛋白质酪氨酸激酶类; 细胞增殖
ABSTRACT: Objective To investigate the effect and mechanism of cucurmosin and STI571 on K562 cell growth. Methods MTT was used to evaluate the growth inhibitory effect of cucurmosin and STI571.FCM was used to detect the apoptotic rate induced by cucurmosin and STI571. Western blot was used to investigate the effect of p210Bcr-Abl induced by cucurmosin and STI571. Results Cucurmosin and STI571 exerted a synergistic inhibitory effect on K562 cell growth(qgt;1.15). FCM showed that cucurmosin and STI571 also exerted a synergistic apoptotic effect on K562 cells(qgt;1.15). Western blot indicated cucurmosin and STI571 synergistically inhibited the expression of p210Bcr-Abl. Conclusion Cucurmosin enhances STI571 in inhibition of K562 cell growth.
KEY WORDS: Cucurmobita moschata; K562 cells; plant proteins; receptor protein-tyrosine kinases; cell proliferation
南瓜蛋白(cucurmosin)是从南瓜瓤中提取的I型核糖体失活蛋白(ribosome-inactivating protein,RIP),相对分子质量约27 kD,为碱性单肽链糖蛋白,具有抗肿瘤和促分化作用[1-4]。STI571(Gleevec,CGP57148B,imatinib mesylate)是Bcr/Abl融合蛋白酪氨酸激酶( protein tyrosine kinase,PTK)活性的竞争性抑制剂,临床上用于治疗Bcr/Abl表达阳性的慢性粒细胞白血病(CML)和急性淋巴细胞白血病(ALL),疗效显著[5-6]。笔者探讨南瓜蛋白与STI571联合抗K562细胞的作用及其机制。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 药品与试剂 南瓜蛋白由本课题组制备,纯度gt;95%。STI571(瑞士诺华公司)经萃取、重结晶所得,纯度达99%,溶解于DMSO中,配成10 mmol/L,于-20 ℃储存备用。抗c-Abl抗体(美国Santa Cruz公司)。
1.1.2 细胞株及培养条件 人慢性粒细胞白血病细胞株K562(中国科学院上海细胞研究所),培养于含10%小牛血清、1×108 U/L青霉素、100 mg/L链霉素的RPMI 1640培养液,在37 ℃、体积分数为0.05的CO2条件下培养。细胞接种24 h后进入指数增长期。
1.2 方法
1.2.1 南瓜蛋白单独或联合STI571对K562细胞的抑制作用 K562细胞悬液200 μL[(2~4)×109 L-1],加入96孔板中,分别设空白组、不同浓度药物组及加等量溶剂阴性对照组,每个浓度重复4孔,无细胞孔为背景,各孔终体积相同。将培养板置于37 ℃、体积分数为0.05的CO2培养箱培养48 h,以MTT法测定联合用药对细胞增殖的抑制作用。
1.2.2 南瓜蛋白联合STI571诱导K562细胞凋亡的作用 收集药物处理的细胞,根据凋亡检测
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