层黏素受体下调对蛋白水解酶MMP2、 MMP9、uPA蛋白表达影.docVIP

层黏素受体下调对蛋白水解酶MMP2、 MMP9、uPA蛋白表达影 　 作者：李大江 陈健 陈长宏 王曙光 【摘要】 目的 研究层黏素受体(LNR)反义硫代磷酸寡核苷酸片段(AsODN) 对人胆管癌QBC939细胞基质蛋白水解酶2(MMP2)、基质蛋白水解酶9(MMP9)以及尿激酶型纤维蛋白溶解酶原激酶(uPA) 蛋白表达的影响。方法 应用Western blotting分析浓度12 μmol/L的LNR AsODN作用48 h后，QBC939细胞MMP2、MMP9以及uPA 蛋白表达水平。结果 LNR AsODN能明显抑制人胆管癌细胞表达MMP2、MMP9以及uPA ,与对照组相比，MMP2、MMP9、uPA蛋白表达下降分别为21.8%、16.5%和9.0%(Plt;0.05)。结论 胆管癌细胞QBC939蛋白水解酶MMP2、MMP9以及uPA基因表达水平与层黏素受体的表达水平明显相关，LNR AsODN表达能够使胆管癌细胞蛋白水解酶基因表达下降，提示层黏素受体在介导胆管癌转移中发挥重要作用。 【关键词】 受体 层黏素 蛋白水解酶 胆管肿瘤 细胞系 寡核苷酸类 反义 【Abstract】 Objective To investigate the effect of antisense oligodeoxynucleotide (AsODN) of laminin receptor (LNR) on expressions of matrix metalloproteinases2 (MMP2), MMP9 and uPA in human cholangiocarcinoma cells. Methods Protein expressions of MMP2, MMP9 and uPA of cell line QBC939 were analyzed by using Western blotting after lipofectAMINE and AsODN phosphorothioate of LNR at concentrations of 12 μmol/L were cultured for 48 hours. Results Western blotting showed that AsODN could significantly downregulate protein expressions of MMP2, MMP9 and uPap, with decrease rate of 21.8%, 16.5% and 9.0% respectively (Plt;0.05) in comparison with the control group. Conclusions Gene expressions of MMP2, MMP9 and uPA are markedly related to expression of laminin receptor in cholangiocarcinoma cells and can be decreased by expression of LNR AsODN, suggesting an important role of laminin receptor in the invasion and metastasis of cholangiocarcinoma. 【Key words】 Cholangiocarcinoma; Cell line; Receptor, laminin; Oligodeoxynucleotides, antisense; Proteolytic enzyme 研究发现多种肿瘤细胞表面有层黏素的受体蛋白质——层黏素受体(laminin receptor, LNR)。LNR与包括卵巢癌、 乳腺癌、 肺癌等在内的多种肿瘤的转移能力密切相关［1-3］。基质金属蛋白水解酶2(metalloproteinase2，MMP2)、基质金属蛋白水解酶9(metalloproteinase9，MMP9)以及尿激酶型纤维蛋白溶解酶原激活物(urokinasetype plasminogen activator，uPA)是目前研究得较为广泛的蛋白水解酶。已证实它们参与了多种肿瘤的侵袭转移过程。我们通过运用反义技术，下调胆管癌细胞层黏素受体表达，观察其对MMP2、MMP9、uPA表达的影响。 1 材料与方法 1.1 细胞培养 本实验所使用的细胞株(胆管癌QBC939细胞株)为第三军医大学王曙光教授［4］建立的高转移性亚群。在含10%小牛血清的RPMI