弹性蛋白酶及体外循环中血管内皮细胞激活-损伤.docVIP

弹性蛋白酶及体外循环中血管内皮细胞激活/损伤 　 作者：李健权,苟大明, 余志豪 【关键词】 弹性蛋白酶；体外循环；血管内皮细胞 　　弹性蛋白酶（neutrophil elastase,NE）是中性粒细胞激活后产生的一种炎性介质，是丝氨酸家族的重要成员，不仅能够分解内皮细胞外基质的诸多成分，而且可以促进其他炎性介质释放，触发广泛炎性反应。体外循环（extracorporeal circulation,ECC）期间，由于血液与人工材料接触、缺血再灌注、血流动力学急剧变化等非生理因素的影响导致中性粒细胞激活，激活的中性粒细胞脱颗粒产生大量的NE，最终引起内皮细胞激活/损伤。内皮细胞激活/损伤后，通透性增加，血浆蛋白及其他炎性介质的外渗并伴随炎症网络反应扩大,这是ECC后全身系统炎性反应和多器官功能障碍的中心环节,已成为近年来人们研究ECC对机体影响的主要切入点之一。 　　1 ECC期间NE活性的变化 　　中性粒细胞激活后可释放出大量的蛋白酶,如组织蛋白酶、胶原酶、NE等，其中中性粒细胞溶酶体膜遭到破坏后，释放的NE是最重要的一种，也是破坏力最强的蛋白酶。 　　正常机体内存在蛋白酶与抗蛋白酶平衡［1］，使机体不会因为蛋白酶的活性增高而导致损伤，内源性抗蛋白酶：a-抗胰蛋白酶能与90%的NE结合形成NEa-aT复合体，灭活NE，然后被网状内皮系统清除［2］。但是在ECC期间，由于各种非生理因素的影响，使中性粒细胞大量聚集活化，导致溶酶体释放的NE大量增多，使抗蛋白酶不能完全灭活；另外在ECC期间，由于大量的氧自由基的产生，氧化抗胰蛋白酶的活性蛋氨酸残基，使之失去对NE的抑制作用［1］，以致ECC期间NE产生增多，活性增强。 　　2 NE对内皮细胞的损伤 　　2.1 NE对内皮细胞外基质的损伤 内皮细胞外基质是内皮细胞重要的惰性支持物, 而且内皮细胞所表现的介导炎性反应、抗/促凝血等功能与细胞外基质分泌的许多物质密切相关［3］。内皮细胞一旦脱离了细胞外基质，不但影响许多生理功能的发挥，而且去黏附可导致细胞的凋亡，此现象称之为ANOIKS［4］。 　　NE的底物是弹性蛋白，弹性蛋白是构成细胞外基质气血屏障的主要成分，它若被分解，上皮或内皮细胞之间的紧密连接即被破坏，使血管通透性增加。近年来研究表明，许多的血管疾病，特别是中性粒细胞激活引起的肺部疾病与NE裂解细胞外基质成分有关［5］，因此，有学者认为中性粒细胞NE扮演着比其名字所暗示的含义更为广泛的作用［6］。 　　NE不仅可以分解弹性蛋白，而且可以分解细胞外基质的其他成分，如纤维蛋白、胶原、层粘连蛋白、氨基聚糖以及蛋白聚糖等［7］，NE除了本身可以分解细胞外基质的各种成分，而且活性增强，通过激活基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-3、MMP-9和抑制金属蛋白酶的抑制剂TIMP-1而破坏了蛋白分解平衡［8］，这也加重了蛋白酶对内皮细胞外基质的裂解。当细胞外基质被分解后，可引起内皮细胞凋亡［9］。NE通过分解细胞外基质，也影响内皮细胞的形状［10］，许多细胞功能的发挥必须是在其特定的形状下进行的，当内皮细胞形状改变后，内皮细胞的功能受损［11］。同时当内皮细胞外基质分解,内皮细胞裸露,更容易受到炎性介质攻击而受损。 　　2.2 NE使黏附分子表达增强促进内皮细胞的激活/损伤 ECC期间，中性粒细胞与内皮细胞的黏附是ECC期间内皮细胞损伤重要的环节［12］，而黏附分子（ICAM）-I的表达增强是中性粒细胞与内皮细胞发生黏附，激活/损伤内皮细胞的关键，近来研究表明NE的活性增强，可促进ICAM-I的表达［13］，其机理并未完全清楚。Yamaguchi［14］等在离体研究也指出NE增强黏附分子表达，其机制可能是通过钙离子内流和磷脂酶C信号转导使黏附分子的表达增强，NE的这一特性，间接促进ECC期间内皮细胞的激活/损伤。 　　2.3 NE增强IL-8、TNF-a等产生以及活化激肽、缓激肽、花生四烯酸等导致内皮细胞的损伤 NE不仅可以裂解细胞外基质，而且可以降解许多血浆蛋白，如免疫球蛋白以及凝血因子;活化激肽、缓激肽、花生四烯酸［15-16］，增强IL-8、TNF-a［17］以及CINC-1和CINC -3［18］等趋化因子的表达和释放，而这些炎性介质又能吸引或激活中性粒细胞释放更多NE。NE的这些多重效应构成了级联的炎症网络而形成恶性循环，使炎症网络反应扩大，加重ECC期间内皮细胞的损伤。 　　2.4 NE增强氧自由基的产生而促进内皮细胞的损伤 氧自由基可攻击内皮细胞膜脂或膜蛋白，发生脂质过氧化反应，损伤内皮细胞膜，ECC期间氧自由基产生的途径有很多种，近年来大量研究发现当内皮细胞从细胞外基质脱离，去黏附可以产生氧自由基［19］, 其机理可能是内皮细胞去黏附导致内皮细胞线粒体呼吸爆发