抵抗素对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取影响.docVIP

抵抗素对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取影响 　 作者：李芳萍， 李焱， 傅玉如， 严励， 傅祖植 【摘要】 【目的】构建载有小鼠抵抗素（resistin）基因及其反义核酸的重组真核表达质粒，探讨抵抗素对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取的影响。【方法】 用RT-PCR技术从小鼠脂肪组织扩增抵抗素基因cDNA，A/T克隆于pGEM-T载体，再亚克隆于pcDNA3.1（+）和pcDNA3.1（-）真核表达载体，构建载有小鼠抵抗素（resistin）基因及其反义核酸的重组真核表达质粒pcDNA3.1（+）-resistin和 pcDNA3.1（-）-resistin（-）。将pcDNA3.1（-）-resistin（-）转染小鼠3T3-L1脂肪细胞，通过G418筛选稳定表达的细胞株。3T3-L1脂肪细胞分为对照、瞬时、载体和稳定4个细胞组（每组n=6），用3H-2-脱氧葡萄糖进行非胰岛素和胰岛素介导的葡萄糖摄取试验。 【结果】插入pcDNA3.1（+）的DNA片段的核苷酸序列与小鼠抵抗素基因 mRNA编码区序列完全一致，且方向正确； 插入pcDNA3.1（-）的DNA片段的核苷酸序列与抵抗素基因mRNA编码区核苷酸序列完全一致，且方向相反。对照组、瞬时组、载体组和稳定组的3T3-L1脂肪细胞非胰岛素和胰岛素介导的葡萄糖摄取率的无显著性差别（P gt;0.05）。【结论】成功构建了载有抵抗素基