激酶抑制剂机制解密ITC引领方向.PDF

应用综述 激酶抑制剂机制解密：ITC 引领方向 无标记分析 简介 生物体的激酶组是其基因组中的一组蛋白质激酶，这些蛋白修饰酶是很多治疗领域的潜 微量热法 在靶标。 近年来关于表征人类激酶组的研究和对可用激酶晶体结构的探索导致对激酶作 为药物干预潜在靶标的关注日益增加。 自从制药行业在 20 世纪 80 年代末开始关注激酶起，研发的大多数激酶抑制剂都以酶的 ATP 结合位点为靶标。 然而，Gleevec™ 的研发为此领域的研究注入了新的活力，该药 物是一种酪氨酸激酶抑制剂，可诱导靶标 BCR-Abl 激酶发生结构重组。 这引发了关于 处理激酶抑制的创新理念，包括在 ATP 位点外部结合和尝试防止激酶活化。 详细的酶动力学研究在基于新颖理念表征化合物作用机制中起着不可或缺的作用。 一种 具有极高价值的方法是等温滴定量热法 (ITC)，该方法可提供化合物与靶蛋白结合的完整 热力学资料。 使用该方法产生的数据可对比化合物与不同形式的酶结合的亲和力测定， 例如游离酶、酶-底物复合物、酶-产物复合物、活性和非活性酶。 酶信号传导抑制在肿瘤和炎症领域是久经考验的疾病治疗方法。 我们已经知道，ITC 可 提供信息确定其他配体是否对酶的生物活性有影响，因此本应用报告主要阐述了 ITC 如 何应用于鉴定可赋予这一生物活性的酶的分子间复合物。 ITC 概述 等温滴定量热法可在一次实验中测定结合作用的很多个特性，包括亲和力 (K )、配体结 D 合位点的数量 (n) 以及结合反应的焓 (∆H)。 该方法速度很快，不需要荧光标记，且可用 于研究没有催化活性的蛋白质（这些蛋白质因催化活性的缺失而被排除在酶动力学分析 的研究之外）。 ITC 实验通常涉及在恒定温度下对靶蛋白滴定实验化合物，使用 ITC 仪器测定结合活动 期间释放或吸收的热量。 在针对蛋白激酶的药物研发期间可以多种途径使用此方法。   其中包括： • 蛋白质结构表征和制备，不仅仅是模型配体正确的亲和力方面，还包括正确的化学计 量，从而帮助评估功能蛋白质的量，而无需催化活性 • 分析评价 Malvern Instruments Worldwide Sales and service centres in over 65 countries /contact ©2014 Malvern Instruments Limited 应用综述 • 鉴定可赋予生物活性的分子间复合物，ITC 可提供信息来确定其他配体是否会对试验 化合物的生物活性产生影响，这正是本应用报告关注的焦点。 靶蛋白质量控制 在进行机理研究前，对靶蛋白进行质量控制检查即使不是必须的，也是非常有用的。 应 通过验证蛋白质的特性、纯度、