第五章节 氨基酸发酵机制.pptVIP

第五章 氨基酸发酵机制 第一节 氨基酸生物合成的调节机制 （一）反馈抑制与优先合成 A B C D E 反馈抑制 反馈阻遏 氨基酸生物合成调节机制的基本模式 A B C D E F G 优先合成 反馈抑制 在合成途径分枝点处的优先合成 （二）其他特殊的控制机制 1.多终产物控制 催化分支合成途径共同部分的初始酶，在仅一种氨基酸终产物过剩时，完全不受或微弱或部分地反馈抑制（或阻遏），只是在多数终产物共存下才强烈地控制。有以下几种情况： ①协同（或多价）反馈抑制： ②合作（或增效）反馈抑制： ③同功酶控制： ④积累反馈抑制： 2.顺序控制： A B C D E F G A B C D 3.平衡合成： 4.代谢互锁：从生物合成途径看，是受一种完全无关的氨基酸的控制。它只是在很高浓度下（与生理学浓度相比）才能体现抑制作用，而且是部分性的抑制（阻遏）作用。 B C D E F G × 第二节谷氨酸的发酵机制 一、谷氨酸的生物合成途径及调节机制 1、EMP途径、HMP途径 谷氨酸生产菌存在着两种代谢途径：EMP、HMP ；EMP/HMP=10/90。 2、TCA、DCA和CO2固定作用 1）.TCA环（三羧酸循环） 2）.DCA环（乙醛酸循环） 3）.CO2固定 PEP+CO2+GDP 草酰乙酸+GDP CO2 丙酮酸 苹果酸 草酰乙酸 CO2 NAD+ NADH+H+ PEP羧化酶 苹果酸酶 苹果酸脱氢酶 3、氨的导入 ①α-酮戊二酸还原氨基化→谷氨酸 氨的导入有三种方式 ③谷氨酸合成酶途径 二、 细胞膜通透性控制 ①α-酮戊二酸脱氢酶活性极低或缺失 ③细胞膜对谷氨酸的通透性高 ②由天冬氨酸或丙酮酸通过氨基 转移，将氨基转给α-酮戊二酸 ②谷氨酸脱氢酶活性很高， 不被低浓度的谷氨酸抑制 谷氨酸生产菌的 主要生化特点 第三节 赖氨酸生物合成途径及代谢调节机制 一、赖氨酸生物合成途径(见P77页） 二、细菌中赖氨酸生物合成的调节机制 黄色短杆菌赖氨酸生物合成机制要简单些（诱变育种容易一些，实际应用较多） 葡萄糖 磷酸烯醇丙酮酸 丙酮酸 乙酰CoA 草酰乙酸 天冬氨酸 柠檬酸 α-酮戊二酸 谷氨酸 反馈抑制 优先合成 增强反馈抑制 逆转反馈抑制 ① ② ③ O-琥珀酸高丝氨酸 天冬氨酸 天冬氨酰磷酸 天冬氨酸-β-半醛 高丝氨酸 二氢吡啶-2，6-二羧酸 赖氨酸 高丝氨酸磷酸 苏氨酸 蛋氨酸 异亮氨酸 优先合成 反馈抑制 阻遏 ① ② ③ ④ ⑤ 三、赖氨酸生产菌的育种途径 出发菌株的选择 — 代谢调节比较简单的细菌（如黄色短杆菌、谷氨酸棒杆菌、乳糖发酵短杆菌等） 1、优先合成的转换：渗漏缺陷型的选育 如果降低高丝氨酸脱氢酶活性，则优先合成赖氨酸。 2、切断支路代谢：营养缺陷型的选育 3、抗结构类似物突变株（代谢调节突变株） 类似物中，以AEC效果最佳。 通过诱变，使编码天冬氨酸激酶的结构基因发生突变，使天冬氨酸激酶对赖氨酸及结构类似物不敏感，既使苏氨酸过量，该激酶也不与赖氨酸或类似物结合，但酶的活性中心不变。 4、解除代谢互锁 在乳糖发酵短杆菌中，赖氨酸的生物合成与亮氨酸之间存在代谢互锁，赖氨酸生物合成分支的第一个酶（DDP合成酶）受亮氨酸的阻遏。 解除这一代谢互锁的方法: ①选育亮氨酸缺陷型菌株，或者以抗AEC的赖氨酸的生产菌为出发菌株，经诱变得抗AEC兼亮氨酸缺陷型菌株 ②选育抗亮氨酸结构类似物突变株 从遗传上解除亮氨酸对DDP合成酶的阻遏 ③选育对苯醌或喹啉衍生物敏感株 5.增加前体物的合成和阻塞副产物的生成 前体： 丙酮酸、 草酰乙酸、 天冬氨酸 关键酶： 天冬氨酸激酶 方法： ①选育丙氨酸缺陷型 ②选育抗天冬氨酸结构类似物突变株 ③选育适宜的 活性比突变株 CO2固定酶 TCA循环酶 6.改善细胞膜的透过性 7.选育温度敏感突变株 8.应用细胞工程和遗传工程育种 9.防止高产菌株回复突变 作业： 选育高产高丝氨酸生产菌的育种途径（包括出发菌