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通过构建轻链二级库对人源抗TNF-A抗体进行亲和力成熟
4 3 生命科学研究 V o l . 4 N o. 3
2 0 0 0 9 L if e Science Research Sep . 2000
: 1007 -7847 ( 2000) 03-0267 -0 6
X
-
TNF A
1 2 1 1 1 1 1
袁 斌 张广育 王 慧 何 君 刘怀田 俞晓峰 黄 策
( 1. 100071;
2. 100054)
: 通过构建轻链二 库的方法 对人源抗 T N F -A单抗Fa b 进行轻链置换 并筛选出具
有更高亲和力的人源抗T N F -A单抗的F ab . 首先用RT -PCR 技术扩增正常人全套抗体轻链
基因 并与已获得的人源抗 - 单抗的重链基因配对 构建人源抗 - 噬菌体抗体轻
T NF A T N F A
链二 库 然后筛选与T N F-A具有更高亲和力的克隆. 经过三轮的生物淘筛( bio panning ) 获
得了比原来的人源抗 T N F-A单抗F ab 具有更高亲和力的人源抗体F ab . 轻链二 库筛选法
能够有效使抗体的亲和力提高 为解决噬菌体抗体库法制备的人源抗体的亲和力较低这 一难
题提供了一种有效的方法.
: 人源抗体; 亲和力成熟; 轻链库; 肿瘤坏死因子
: R392 . 11: A
- -
Affinity Maturation of Human Anti TNF A Fab Through
Constructing a Light Chain Second Library
Y UA N Bin1 ZHA N G Gu an g-yu2 W A N G Hu i1 HE Jun 1
L IU Hu ai-tian 1 Y U X iao -f eng 1 HU A N G Ce 1
( 1. In stitute o f M icr obio lo gy and Ep idem io lo gy A cadem y of M ilitar y M edical Sciences Beijing 100071
China ; 2 . Dep artm ent of M icr obio log y Cap it al U niver sity o f M edical Science Beij ing 100054 China )
Abstract: Human ant i-T N F -A ant ibody Fab s w it h hig her af f init y w as obt ained t hr oug h
replacing t he light ch ain frag ment facilit at ed by con st ru ct ing a light ch ain seco nd library .
First ly amplify the rep erto ire of t he hum an light ch ains g enes f rom human p eripher al
-
blood ly mpho cyt es u sing RT
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