第六章：微生物培养技术与动力学.pptVIP

◆多级连续培养 前一反应器的出料为后一反应器的进料/部分进料。此操作方式可以解决不同生产阶段有不同生产要求的矛盾，同时解决快速生长和营养物质充分利用之间的矛盾。 对于代谢产物如青霉素，其菌体生长的最佳温度为30°C, 而产青霉素的最佳生产温度为20°C，在单级反应中无法兼顾，而采用双罐联续培养，可以解决了上述问题。 在单级培养中，从发酵罐中排出的料液所含的营养物的浓度必须足够低，Monod方程可知，s低，会导致μ减小。采用多级罐串联使问题解决。 对第一个罐物料衡算D1= μ1 对第二个罐物料衡算 二个罐物料停留的总时间 对第一/二个罐细胞浓度， 单罐时底物浓度及双罐时的第二个罐内浓度相同，因而有μ=μ2 已知μ=0.5（min-1),Ks=0.3(g/L),S0=50(g/L),S1=5(g/L), S2=0.2(g/L),求采用单、双级连续反应器的所需的时间τ 对于单罐，μ=D, τ=1/D,采用单罐时S=S2, 对于双罐，μ1=D1, τ1=1/D1, 应用Monod方程，解出： μ1等于0.47，μ2为0.2 解得：τ2=0.48 (h) τ1=2.13, 总时间τ=2.61 （h) τs=1/μs=5 (h) 6.1.3 分批补料培养法 又称流加。介于分批及连续培养之间的一种模式。由Yoshide1973提出。 此模式进料连续或按一定的规律，出料则在一定的时间排除部分料液。为不稳定的过程。 ◆分批补料的计算 消除快速利用碳源后，造成的阻遏效应，维持罐内良好的需氧发酵条件。 避免培养基中某些成分的毒害作用。 生产酵母培养基中含有麦芽汁过多，开始导致细胞的过速增长，同时细胞对氧气的需求大于设备提供的能力，是培养系统成为厌氧条件，是酵母产生乙醇，导致抑制细胞的生长，成为阻遏效应。 同理，面包酵母如果添加葡萄糖超过某一值时，也会产生此效应。 青霉菌发酵生产青霉素，要求精确的控制葡萄糖的补入速率。生长期是葡萄糖的含量适宜。而在生产期控制补料速率，使青霉素的合成速率达到高值。 另一方面，产物前提物的添加，有利于产量的提高，担当此物质对细胞的生长有毒害作用使，应采用缓慢的加料方式，如苯乙酸钠。 Laboratory process developmentShake Flask Experiments Optimization of conditions for cell growth and product formation using shake flask experiments: 1. pH 2. Temperature 3. Dissolved oxygen (DO) 4. Substrate choice 5. Maximal and optimal substrate concentration 6. Others 第六章：微生物培养技术及动力学 6.1 微生物发酵动力学 6.1.1 分批培养 营养物和菌种一次加入进行培养，直到结 束放出，中间除了空气进入和尾气排出，添加消泡剂和调节pH, 及外部没有物料交换, 属于非稳态过程。 优点：放大到罐操作比较容易 ，操作简单 缺点：培养初期营养物过多/后期代谢产物的积累可能抑制生长，培养的中后期可能又因为营养物浓度过低而降低培养效率 ，总设备生产能力不高 ● 延迟期(lag phase) 是微生物适应新环境的过程.,表现为细胞的数量没有增加,但一些参及物质的运输/与初级代谢相关的酶类会诱导合成;以及一些辅助因子的合成需要一些时间。所以，其时期的长短与细胞的生理状态和细胞的浓度有关。 ● 对数生长期(log phase/exponential growth phase) 培养基营养丰富，细胞生长不受限制，细胞浓度随时间指数生长。 △分批培养过程中，微生物的生长曲线 dx/dt =μx, μ=(1/x) (dx/dt) x: 细胞的浓度 g/L t: 培养时间 h, μ : 比生长速度 h-1 单位菌体浓度引起的菌体增长，反映了指数生长期细胞生长的快慢。 对数期μ为常数,初始条件: t0=0, t; x0, x, 积分得： 6.87*1010 影响μ的因素 细胞的种类， 培养条件（培养温度，限制性基质浓度，pH, 溶氧） 倍增时间td：当细胞群体增加一倍时，所需的时间。由公式 描绘营养物的浓度对微生物生长的影响：1942年， Monod总结了经验方程 微生物td: 0.5-5 h 动物细胞td:15-100 h 植物细胞td: 24-74 h td 和μ反映在对数生长期微生物的生长特性， Monod方程呈双曲线。μm最大比生长速率，s: 限制性营养物质的浓度，Ks