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HIV检验技术探究进展 　 作者：宋兴华，姜世辉，向华国 【关键词】 人类免疫缺陷病毒；聚合酶链反应；抗原 　　［摘要］ 艾滋病是由人类免疫缺陷病毒(HIV)感染引起的一种严重威胁人类身体健康的疾病。为有效遏止HIV的蔓延，除寻求更加有效的疫苗和治疗药物外，HIV早期诊断十分重要，其早期诊断主要靠实验诊断，包括病原学、免疫学、分子生物学等。 　　［关键词］ 人类免疫缺陷病毒；聚合酶链反应；抗原 　　Study the Progress of HIV Examine the Technique Abstract：AIDS is a severe disease threatening the human health and caused by HIV the ealy diagnosis plays the important role for prevent the AIDS spread besides the effective vaccine and the drug.Its diagnosis methodes mainly incude the immunology and Molecular Biology et. 　　Key words：HIV;PCR;Antigen 　　1981年美国发现世界首例艾滋病患者，1983年由美国人罗伯特加洛领导的研究小组成功分离出艾滋病毒(HIV)，引起全世界对其进行广泛深入的研究。据联合国艾滋病规划署报道：截止2004年底，估计全球有HIV感染者3 940万人(3 590万~4 430万)；2004年，全球估计有490万(430万~640万)新感染者，310万(280万~350万)人死于艾滋病；而且每天有14 000人新感染HIV，给人类造成巨大的经济损失和社会危害。面对这一世界性温疫，全世界科学家使出浑身解数，寻找致病线索和治疗药物，而寻求更加特异、灵敏、准确的检测方法是一项重要的基础性研究。自1985年第一个艾滋病诊断试剂盒问世以来，HIV检测技术发生了巨大的变化，下面就此领域的研究进展作一检述。 　　1　抗原检测应用 　　免疫荧光法、ELISA法及放射免疫直接测HIV抗原，通常测P24抗原，由P24抗原出现于抗体出现之前，对窗口期感染的早期诊断有帮助意义，此法简便易行，还常用于细胞培养HIV的测定，抗HIV医药费物疗效的检测及HIV感染者发展为艾滋病的动态观察。 　　2　抗体检测HIV抗体 　　一般在感染4周后逐渐出现，可延至终身，是人类重要的检测指标，相比于近年来逐步发展起来的用免疫技术测定其感染因子，检测HIV特异性抗体仍是诊断艾滋病的重要依据。 　　2.1　HIV抗体检测初筛实验 　　2.1.1　酶联免疫吸附实验(ELISA) 　　ELISA法敏感性好且操作简便。目前酶免法测HIV抗体试剂已发展到第四代，市售试剂有美国的雅培、上海科华、北京万泰等其敏感度几乎100%，特异在98.1%~99.8%之间，并且适用于批量操作，缺点是有一定假阳性。 　　2.1.2　免疫荧光法(IFA)　　　　　　　　　　　　 　　是借助抗体反应进行荧光染色的诊断技术，由于非特异荧光较难去除等缺点，因而仅用于HIV抗体初筛，阳性结果需经确证实验证实，该法操作简便、敏感性高、特异性比ELISA法高。 　　2.1.3　凝集实验　　　　　　　　　　　　 　　具有不需任何设备，一步即可迅速得到结果的优点，敏感性和特异性与ELISA相近。缺点是有假阳性，且价格昂贵，亦仅作初筛实验。 　　2.1.4　在ELISA基础上发展起来的金免疫渗滤实验(GIFA)，GIFA始于1985年，最初以酶作为标记物，1989年发展以胶体金为标记物用于检测艾滋病毒抗体的渗滤实验。1990年Oskiowicz等应用硒作为标记物建立了免疫层析实验。上述两种方法具有快速、简单，不需要任何仪器设备，几分钟可用肉眼观察结果的优点，目前在临床检测中已广泛应用。 　　2.2　确证实验 　　2.2.1　免疫印迹实验(WB)　　　　　　　　　　　　 　　WB是目前最特异、敏感的证实HIV感染的方法，也是国内HIV确认的首选方法。WB实验能检测到gp120、fp160、p66、p51、gp41、p31、p24和17Kda等抗原相应的抗体。我国对于WB实验结果判断标准：HIV阳性：至少有两条env带和至少一条env带和p24带同时出现。HIV阴性：无任何HIV抗体特异带出现。HIV可疑：出现HIV抗体特异带，但带型不足以确认阳性者。WB实验操作较ELISA稍复杂，检测需在确证实验室进行。由于自身抗体的存在，该方法仍有假阳性。 　　2.2.2　条带免疫印实验(LTA)　　　　　　　　　　　　 　　其原理和操作方法与WB实验基本相同，只有条膜来源