KDR mRNA在非小细胞肺癌中表达及其临床意义.docVIP

KDR mRNA在非小细胞肺癌中表达及其临床意义 　【摘要】 探讨血管内皮生长因子受体2（KDR）与微血管密度表达与非小细胞肺癌（NSCLC）生物学行为与预后的关系。方法 分别应用原位分子杂交及免疫组织化学方法检测62例NSCLC和16例肺良性瘤样病变组织中的KDR mRNA、MVD的表达。结果 （1）NSCLC与肺的良性瘤样病变MVD、KDR mRNA的表达具有显著性差异（P＜0.01 ），肺癌MVD随KDR mRNA 表达增强而增多，两者呈正相关。（2）MVD和KDR mRNA的表达在肺腺癌高于肺鳞癌（P＜0.01）两者随淋巴结转移、TNM分期的进展而升高（P＜0.01）。（3）生存期＜5年者MVD和KDR mRNA的表达显著高于生存期＞5年者（P＜0.01）。结论 MVD和KDR mRNA的表达与NSCLC的发生、发展、转移关系密切，可以作为评估NSCLC生物学行为及预后判断的指标，KDR可能成为NSCLC的一个潜在的抗血管生成治疗的靶点。 【关键词】 血管内皮生长因子受体2 非小细胞肺癌 原位分子杂交 微血管密度 　　0 引言 　　肺癌的侵袭和转移是患者治疗失败和死亡的主要原因，而新生血管的生成是肺癌侵袭和转移的解剖学和生理学基础，血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor, VEGF）及其受体2（Kinase domaincontaining receptor , KDR/VEGFR2/Flk1）在促进内皮细胞的分裂与增殖，促进血管生成中起着关键作用。许多肿瘤及其血管内皮细胞均有KDR表达升高，KDR表达水平与血管内皮细胞的更新速度呈正相关。 　　本研究应用原位分子杂交技术检测非小细胞肺癌（Nonsmall cell lung cancer, NSCLC）中KDR mRNA的表达，应用免疫组化SP法检测微血管密度（Microvascular density, MVD）的表达，试图探讨KDR mRNA的表达对MVD的影响,以及KDR mRNA 表达与临床病理特征及预后的相关性，以探测KDR的作用机制，为NSCLC的抗血管生成治疗提供理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 临床资料 选用1999年3月至2000年3月我院心胸外科手术切除并经病理学确诊的NSCLC 标本62例，其中男44例，女18例；年龄37～76岁，平均55.9岁。所有患者术前均未行放疗和化疗，经影像学检查确认无远处转移。按WHO《肺肿瘤组织学分型》（1981）标准，包括肺鳞癌27例，肺腺癌35例。组织学分级为Ⅰ级7例，Ⅱ级25例，Ⅲ级30例。按UICC（1997）肺癌分期标准，包括Ⅰ期17例，Ⅱ期10例，Ⅲ期33例，Ⅳ期2例。肿瘤长径为1.8㎝～11.0㎝，平均5.0㎝ 。有淋巴结转移39例，无淋巴结转移23例。其中42例有完整随访资料，生存期≤5年者32例，＞5年者10例。另选同期肺良性瘤样病变16例（其中结核球11例，炎性假瘤3例，浆细胞肉芽肿1例，纤维软骨脂肪瘤1例）组织标本作对照。 　　1.2 主要试剂 CD34鼠单抗、免疫组化SP试剂盒和DAB显色试剂购自福州迈新生物技术开发有限公司，KDR mRNA原位杂交试剂盒购于武汉博士德生物工程有限公司。 　　1.3 实验方法 石蜡块标本制成4μm切片，原位分子杂交采用胃蛋白酶暴露mRNA核酸片断，参照试剂说明书进行，以细胞胞质内出现棕黄色颗粒为阳性杂交信号，少量胞核也有阳性信号，无阳性信号为阴性。免疫组织化学染色程序按SP试剂盒说明书进行，同时用已知的阳性切片在同条件下染色作为阳性对照，用PBS代替一抗作为空白对照。 　　肿瘤MVD的测量应用HPIAS－2000型全医学彩色图像分析系统分析处理。参照Weidner方法[1]，先在低倍光镜（×20，×100）下扫描整张切片，确定3个高血管密度区，即“热点”，再在高倍镜（×400）下计数被染成黄色的微血管数目，结果用3个高倍镜视野下微血管数目的平均数表示。 　　1.4 统计学处理 使用SPSS11.5统计软件包，两个均数之间的比较用student t 检验，计数资料用χ2检验 。 　　2 结果 　　2.1 MVD与NSCLC NSCLC组织内微血管密度分布，相互间联系紧密，MVD平均为43.78±12.46；肺良性瘤样病变微血管分布均匀且少，MVD平均为7.42±4.12 ，NSCLC较肺良性瘤样病变显著升高（P＜0.01）（表1）。从表1还可以看出，肺腺癌组织MVD明显高于鳞癌组织（P＜0.05），Ⅲ＋Ⅳ期组MVD明显高于Ⅰ＋Ⅱ期组（P＜0.05），有淋巴结转移组MVD明显高于无淋巴结转移组（P＜0.05），而不同组织学分级与肿瘤大小间无显著性差异。 　　2.2 KDR