青光安混悬液对兔慢性高眼压模型筛板结构及Ⅳ型胶原纤维含量的影响实验的研究.pdfVIP

材料与方法 l实验材料 1．1实验动物 湖南中医药大学动物实验室提供。 1．2药品与试剂 药物由湖南中医药大学附属第一医院药剂科提供，使用时稍使其温热后灌胃。 O．5％的马来酸噻吗洛尔滴眼液：武汉五景药业有限公司提供，批准文号： 国药准字 O．5％的卡因：湖南中医药大学附属第一医院药剂科生产，批准文号：湘 卫药9705190。 0．25％氯霉素眼药水：南京立业制药股份有限公司生产，批准文号： 041122。 申兴制药厂惠赠；o．5％地塞米松磷酸钠注射液：贵州华空制药有限责任公司 生产，批号：030531。然后按照比例配制所需溶液。 25％乌拉坦及10％的甲醛固定液：湖南中医药大学病理实验室提供。 2．5％戊二醛：由中南大学湘雅医学院电镜室提供。 IV型胶原纤维免疫组化试剂盒：武汉博士德生物工程有限公司提供。 1．3器材 Sehiotz眼压计(苏州医疗器械厂) 手术显微镜(美国爱尔康公司) 眼科剪、镊、3／8弧长4×12圆针、3-0号缝线(自备) 修块机(瑞典LKB公司11800型) 超薄切片机(瑞典LKB公司8800型) Hitachi H-600型透射电镜显微镜(日本日立公司) Leica石蜡切片机(德国Leica公司) 石蜡包埋机(英国山顿) Pro Plus4．5版本图象分析系统(北京航空航天大学) Imaging 2实验方法 2．1动物分组 为空白组，B为模型组，c为青光安组，D为噻吗心安组，E为青光安联合噻 吗心安组。 2．2慢性高眼压动物模型的制作 参照徐岩【31、王昌鹏【q的造模方法，并加以改进． 穿刺，形成一个小针孔穿刺并抽出房水约O．1ml，然后在此小针孔对侧的角膜 周为诱发-陵性青光眼成功。 (注：关于避免前房穿刺时房水渗漏的方法，参照李绍珍主编的第二版 《眼科手术学》前房穿刺法，穿刺口选在角膜缘内2mm处，在穿刺口对侧用 眼球镊子固定后，将针头平行虹膜面刺入角膜，待其尖端已进入角膜组织内， 持固定眼球镊子的手需向刀的方向缓慢牵拉眼球，使刀尖在角膜组织内逐渐 进入2ram后进入前房，这样即可避免房水渗漏。识别刀尖已进入前房的方法 是：在手术显微镜下观察，穿刺针头尖端的颜色发生改变。) 2．3给药方法与途径 按照人与动物体重等效剂量比率表计算，以成人临床常用剂量的3倍给药。A 10ml／kg，并予以噻吗心安眼液点眼，各2次／d。 2．4标本的采集 取材。动物以空气栓塞法处死后，立即将眼球取出。在冰上用眼科剪沿角膜 缘剪开眼球后，去除晶体、玻璃体，各组每只眼球取视乳头及周边Imm范围 ’ 箱保存以做光镜用。 2．5检测指标与方法 2．5．1眼压 将造模前及造模后当时、造模后1周、2周、5周作眼压测量，并进行统 固定后使其侧卧于桌上，尽量使角膜与桌面平行，使角膜恰在水平正中位。 检查者右手持眼压计，左手拇指及食指轻轻分开上下睑，固定在眶缘上，切 勿压迫眼球，同时利用一定技巧尽量避开第三眼睑。眼压计底板垂直放在角 膜中央，不得施加任何压力，开始用5．59砝码测量，迅速读指针刻度，即提 起眼压计，以免擦伤角膜上皮，如指针读数小于“3”时，则应更换较重砝码， 重新测量。将测出的读数，查核换算表求得眼压数。在测完眼压之后，滴入 数滴抗生素眼药水，以防感染。 2．5．2光镄观察 将10％甲醛溶液固定的眼球视乳头标本做光镜送检，石蜡包埋，通过视 下观察并显微摄像。 2。5．3电镜观察 1：1比例浸 4 日立H-600透射电镜观察筛板结构。 2．5．4筛板Ⅳ型胶原纤维定量检测 复暴露抗原；(5)陆续滴加正常山羊血清封闭液、一抗、生物素化山羊抗小鼠 利用ImagingProPlus4．5版本图象分析系统得出平均光密度。 2．6统计方法 义的检验标准。根据统计分析要求，对原始计量资料数据进行正态检验和方 差齐性检验，方差齐者两两比较用q检验，方差不齐采用秩和检验，数据用E