中国苗族人群血管紧张素原基因变异及心肌梗死关系.docVIP

中国苗族人群血管紧张素原基因变异及心肌梗死关系 　 作者：符自清，黄生用，祝有国，龙华 【关键词】 心肌梗死 　　【摘要】 目的 探讨中国苗族人群血管紧张素原（AGT）基因M235T分子变异与心肌梗死（MI）的关系。方法 采用聚合酶链反应、限制性片段长度多态性（PCR/RFLP）分析，对73例MI患者和116例健康对照组进行AGT基因M235T等位基因检测。结果 MI患者AGT组235TT型（78.08%）高于对照组（43.96%），差异有非常显著性（P＜0.001）；T235等位基因（86.30%）的频率亦显著高于对照组（64.50%），差异有显著性（P＜0.05）。结论 AGT基因235TT型可能是中国苗族人群MI发病的重要危险因素之一。 　　【关键词】 心肌梗死；血管紧张素原；基因；聚合酶链反应 　　文献报道AGT基因存在多种变异，其中一种（M235T）位于外显子2核苷酸704处胸腺嘧啶（T）被胞嘧啶（C）所代替，导致编码产物第235号氨基酸（M）变异为苏氨酸（T），这种变异可导致冠心病和心肌梗死（MI）发病的危险性增加［1～2］。近几年来AGT基因与心血管疾病的关系日益引起重视。本研究旨在探讨AGT基因M235T分子变异与中国苗族人群MI发生的关系。 　　1 对象与方法 　　1.1 研究对象 　　1.1.1 健康对照组 共116例，男67例，女49例，平均年龄（56.6±10.4）岁，且家族史中无MI或脑梗死。 　　1.1.2 心肌梗死（MI）组 共73例，男42例，女31例，平均年龄（59.6±10.4）岁。MI的诊断标准依据1979年WHO颁布的MI诊断标准。并做血清胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、甘油三酯（TG）、载脂蛋白（A、B）、脂蛋白（a）、血糖（BS）。有心肌酶谱和心电图的典型改变，其中43例做ECT心肌灌注显像示心肌前壁及下壁心肌梗死。 　　以上两组均为苗族，家族婚姻史为世代族内通婚。来源于湖南西部吉首及重庆市秀山县、贵州毗邻地区的苗族群聚居区。对照组和心肌梗死（MI）组DNA样本分别来源于以上地区1999年3月～2003年9月门诊体检和住院病人。 　　1.2 方法 　　1.2.1 人基因组DNA的抽取 抽取外周静脉血5ml抗凝（EDTA-Na2），用6%Dextran(M6.0万）分离白细胞，蛋白酶K消化细胞核、氯仿抽提和乙醇沉淀、双蒸水重溶基因组DNA。具体步骤参考《分子克隆实验指南》。 　　1.2.2 AGT基因M235T分子变异检测 采用PCR/RFLP方法分析AGT基因的基因型，引物位于AGT基因第2外显子内，由Gibco-BRL公司合成，其序列为5-CGTTTGTGCAGGGCGTGGCTCTC-3’和5-AGGGTGCTGTCCACACTGGACCC-3’（AC为非配对碱基）。在AGT基因外显子2核苷酸704处T转变C，并不改变限制性位点，但产生一个适合被Tth111I(CNNNGTC）酶切的“半位点”，与之相应的另一个“半位点”的引入是通过存在两个非配对碱基的PCR引物来完成，这两个非配对碱基并不干扰PCR的延伸。总反应体积为50μl。PCR程序：预变性94℃ 4min后，变性94℃ 30s，退火68℃ 60s，延伸72℃ 60s，最后72℃ 延伸8min，共30个循环，结束PCR。PCR产物经Tth111I（Promega公司）的限制性内切酶酶切（操作参照产品说明书）取酶解产物10μl用8%聚丙烯酰胺凝胶电泳。EB染色后，UV透射仪上检测电泳条带并记录。 　　1.2.3 AGT基因M235T分子变异应用PCR/RFLP检测结果的判断标准 AGT基因M等位基因纯合型（235MM型）无酶切位点示一条163bp的扩增片段；AGT基因T等位基因纯合子（235TT型）被Tth111I酶切产生一条新的140bp的扩增片段；AGT基因M235T杂合子（235MT型）则同时具有163bp和140bp两种片段。 　　1.2.4 统计学方法 两组均数比较采用t检验；两组频数分布比较采用χ2检验。 　　2 结果 　　2.1 MI组和对照组血脂、脂蛋白（a）和载脂蛋白有关的危险因素的比较 MI组脂蛋白（a）、ApoB显著高于对照组（P＜0.05），其余指标差异无显著性。见表1。 　　表1 MI组和对照组血脂、脂蛋白（a）和载脂蛋白有关的危险因素的比较（略） 　　注：*t=2096，P＜0.05；**t=3.07，P＜0.05 　　　2.2 MI组和对照组 AGT基因型分布和等位基因的频率比较 在73例MI患者中235TT型57例，235MT型12例，235MM型4例。而对照组116例中235TT型51例，235MT型47例，235MM型18例。MI组235TT型频率（78.08%），非常