增殖细胞核抗原及凋亡相关基因蛋白在肺鳞癌中表达及意义.docVIP

增殖细胞核抗原及凋亡相关基因蛋白在肺鳞癌中表达及意义 　 作者：张瑾，李海，康培良，汪继勇，陈芳，张阳　 【关键词】 肺；鳞癌；增殖；凋亡；增殖细胞核抗原；Bcl 　　［摘 要］ 目的：分析增殖细胞核抗原（PCNA）、Bclxl、Bak蛋白在肺鳞癌中的表达，探讨其与肺鳞癌发生、发展的关系。 方法： 应用免疫组化法对40例肺鳞癌组织中PCNA、Bclxl、Bak蛋白的表达进行观察和分析。结果： PCNA在肺鳞癌中的阳性表达率显著高于正常支气管黏膜（Plt;0.05）。Bclxl在肺鳞癌中的阳性表达率显著高于正常支气管黏膜（Plt;0.05）。Bak在肺鳞癌中的阳性表达率显著低于正常支气管黏膜（Plt;0.05）。随着肿瘤分化程度的降低，肺鳞癌中PCNA的阳性表达呈上升趋势，而Bclxl及Bak的阳性表达呈下降趋势。 结论：PCNA、Bclxl、Bak都参与了肺鳞癌的形成和发展，因此，有效地控制细胞的增殖与凋亡，对肺鳞癌治疗有重要的研究价值，可为肺鳞癌的治疗提供新的思路。联合检测PCNA、Bclxl、Bak在评估肺鳞癌的发展及判断转移趋势方面均具有重要意义。 　　［关键词］ 肺；鳞癌；增殖；凋亡；增殖细胞核抗原；Bclxl；Bak 　　恶性肿瘤的发生、发展及转移与细胞增殖和分化失常有关。细胞凋亡是由于细胞内外环境变化或死亡信号激发以及在基因调控下所引起细胞主动死亡的过程，其发生是细胞受促进性和抑制性双向因素共同调节的结果。Bcl2基因家族是细胞凋亡的重要调节者，因其功能特点又分为抗凋亡蛋白家族如Bclxl和促凋亡蛋白家族如Bak。本研究应用免疫组化方法检测肺鳞癌组织中增殖细胞核抗原（Proliferating cell nucler antigen, PCNA）和凋亡相关基因蛋白Bclxl、Bak的表达，旨在探讨PCNA、Bclxl和Bak基因产物在肺鳞癌发病机制中的作用。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 选择本院2000年至2005年胸外科手术切除的肺癌石蜡标本40例。均经HE染色，病理组织学确诊。其中男27例，女13例，年龄37岁～60岁。对照组为正常支气管黏膜20例。 　　1.2 方法 肺癌标本均经10%的甲醛固定，常规石蜡包埋，切片厚4 μm～5 μm，载玻片经多聚赖氨酸处理，防止脱片，微波抗原修复。兔抗人Bclxl多克隆抗体（工作浓度1∶50），兔抗人Bak多克隆抗体（工作浓度1∶50），鼠抗人PCNA单克隆抗体（工作浓度1∶50）。免疫组化试剂盒、DAB显色剂试剂盒均购自福州迈新公司。PBS冲洗、DAB显色、苏木素复染、常规脱水透明、树胶封片，以PBS代替一抗作阴性对照。 　　1.3 结果 阳性细胞为呈棕黄色或棕褐色颗粒的反应产物，光镜下任取4个高倍视野进行细胞计数，至少计数200个细胞，以阳性细胞占细胞总数的百分比表示阳性表达程度。0~5%为阴性（-）；6%~10%为弱阳性（+）；gt;10%为阳性（++）。 　　1.4 统计方法 两组间率的比较采用χ2检验，相关性分析采用Spearman秩相关检验，以Plt;0.05为差异有显著性。 　　2 结果 　　PCNA在肺鳞癌及正常支气管黏膜上皮中的表达：以细胞核中出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性表达；Bclxl在肺鳞癌及正常支气管黏膜上皮中的表达：以细胞浆或核膜上中出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性表达；Bak在肺鳞癌及正常支气管黏膜上皮中的表达：以细胞浆或核膜上中出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性表达；Bclxl、Bak 、PCNA在肺鳞癌中的表达情况比较及相关分析，见表1、表2。 　　表1 Bclxl、Bak、PCNA在肺鳞癌和正常肺组织中表达（略） 　　表1提示：肺鳞癌中Bclxl蛋白表达较正常支气管黏膜明显升高，差异有显著性（Plt;0.05）。肺鳞癌中Bak蛋白表达较正常支气管黏膜明显降低，差异有显著性（Plt;0.05）。肺鳞癌中PCNA蛋白表达较正常支气管黏膜明显升高，差异有显著性（Plt;0.05）。 　　表2 Bclxl、Bak、PCNA与肺鳞癌病理分级的关系（略） 　　上表提示：随着肿瘤分化程度的降低，肺鳞癌中PCNA蛋白的阳性表达升高，差异有显著性（Plt;0.05），而Bclxl蛋白的阳性表达降低，差异有显著性（Plt;0.05），Bak蛋白的阳性表达降低，差异有显著性（Plt;0.05）。 　　　3 讨论 　　物质合成和细胞增殖的活跃是肿瘤发生发展的重要基础，而肿瘤组织发生发展的重要原因之一是细胞异常增殖和凋亡失衡。我院该项研究的重点放在对PCNA、Bclxl和Bak表达的观察与分析上，旨在进一步探讨其发病机制，为更好的治疗方案提供新的思路。肿瘤的发生、发展与细胞增殖周期调控密切相关。PCNA是DNA复制所必需的调节蛋白，是一种了解细胞周期在特定时间细