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壳寡糖抗肿瘤作用及免疫调节机理探究* 　 作者：吴海明，华晓阳，何登全 【摘要】 目的 研究壳寡糖对小鼠肿瘤生长和转移的抑制作用以及壳寡糖对培养的巨噬细胞相关的细胞因子表达的影响。方法 接种肿瘤的小鼠尾静脉注射壳寡糖，观察壳寡糖对肿瘤的生长和抑制作用。用相对定量的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术和酶联免疫吸附实验(ELISA)检测壳寡糖对巨噬细胞相关细胞因子转录和翻译水平的影响。结果 壳寡糖对S180肉瘤的抑瘤率为35.02%（P＜0.001)，对Lewis肺癌的转移灶的影响：实验组（2.1±1.73），对照组（4.0±2.14），两组比较，P＜0.05。巨噬细胞加入壳寡糖作用24h后，细胞因子的表达明显增强(P＜0.01)。结论 壳寡糖具有良好抑制肿瘤生长和转移的作用。壳寡糖可增强巨噬细胞相关的细胞因子表达。 【关键词】 壳寡糖；肿瘤；巨噬细胞；细胞因子 【Abstract】 Objective To study the influence of oligochitosan in inhibiting growth and metastasis of tumor in rats， and in expression of cytokines associated with macrophage. Methods Inhibition of growth oftumorwas observedafteroligochitosaninjected into rats throughtailvein，the influence in transcription and translation of cytokines associated with macrophage was measured by RT-PCR and ELISA techniques.Results Inhibition rateof sarcomaS180 was 35.02%（P＜0.001) after injection of oligochitosan. The influence in metastasisof Lewis lung cancer(P＜0.05)：experiment group（2.1±1.73），controlled group（4.0±2.14）. 24hs after oligochitosan added to macrophage，expression of cytokine increased significantly(P＜0.01). Conclusion Oligochitosan can inhibitgrowth and metastasisoftumor，andenhance expression of cytokines associated with macrophage. 【Key words】 oligochitosan； tumor；macrophage；cytokine 甲壳素是自然界丰富的生物资源之一，其部分脱乙酰化产物壳聚糖，具有抗肿瘤、免疫调节、抑菌等多种生理功能。但壳聚糖不溶于水，利用纤维素酶将其降解为壳寡糖，具有较好的水溶性易被人体吸收，本实验旨在研究壳寡糖对实验性小鼠S180肿瘤和Lewis肺癌的抑制作用以及壳寡糖对体外培养的巨噬细胞相关的细胞因子基因表达的影响。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 壳寡糖 由浙大医学院分子生物学实验室制备。 1.1.2 动物来源 小鼠由浙江大学医学院动物中心提供，体重为18～20g。 1.1.3 小鼠单核巨噬细胞RAW264.7 由中科院上海细胞所提供。 1.1.4 标准DNA marker和ELISA实验试剂 由上海贝西科技公司提供。 1.2 方法 1.2.1 壳寡糖抗肿瘤作用实验方法 无菌取S180肉瘤和Lewis肺癌细胞，制成2×107细胞/ml的细胞悬液；皮下注射肿瘤液于ICR种小鼠（0.2ml/只），次日分组进行实验，每组10只ICR种小鼠。实验组尾静脉注射100mg/kg的壳寡糖，对照组注射生理盐水，停药次日处死小鼠，剥离实体瘤称重或观察转移病灶数，计算抑瘤率（%）。 1.2.2 壳寡糖对巨噬细胞相关细胞因子表达的影响实验方法 培养小鼠采用RT-PCR法和ELISA法研究壳寡糖对巨噬细胞IL-1、TNF-a和IL-18的基因表达的影响：实验组和对照组巨噬细胞→分别提取RNA和收集上清液→RT-PCR法检测mRNA水平基因表达的变化以及ELISA法检测蛋白表达量的变化。 1.3 统计学方法 各组值均采用均数±标准差（x±s）表示，组间采用t检验