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视网膜母细胞瘤病人体细胞中RB1基因突变检测 　 作者：盛迅伦，吴伟民，庄文娟，容维宁，王娟，夏美华，章玲 【摘要】 目的 检测视网膜母细胞瘤(RB)病人体细胞中RB1基因突变，探讨RB1基因突变的分子生物学机制。方法 应用PCR-SSCP技术筛查RB病人白细胞基因组DNA，测序分析确定突变。结果 在12例RB病人中，确定3例RB1基因生殖细胞性突变。他们分别是第10外显子中T至A杂合性突变， 将苯丙氨酸编码序列变为酪氨酸编码序列；第10外显子1bp碱基缺失 (GAT→AT)， 发生阅读框架改变；第22外显子中 A至T杂合性突变， 将精氨酸序列变为终止密码。结论 这3例RB1基因生殖细胞性突变的方式为点突变和小缺失，这些突变改变了RB1基因的遗传信息，致使异常的RB1基因蛋白产生，导致视网膜母细胞瘤的发生。 【关键词】 视网膜母细胞瘤 基因 突变 RB1 Detection of heterozygous mutations of RB1 gene in patients with retinoblastoma 【Abstract】 Objective To study RB1 heterozygous mutations in patients with retinoblastoma.Methods Genomic DNA was used as a template for the PCR reaction to amplify all exons of RB1 gene.These PCR products were screened by single strand conformation polymorphism (SSCP) and subjected to direct sequencing.Results Three germcell mutations in the RB1 gene were identified in collected genomic DNA from RB patients:a T to A transition (TTC→TAC) at exon 10，a deletion G (GAT→AT) at exon 10，a A to T transition (AAG→ATG) at exon 22.Conclusion Mutations in RB1 gene are involving a few base pairs in this study.As a result of such mutation，the normal function of RB is usually disrupted，and retinoblastoma occurred. 【Key words】 retinoblastoma gene mutation RB1 视网膜母细胞瘤（简称RB），是婴幼儿最多见的高度恶性、致死率高的眼内恶性肿瘤。由视网膜母细胞瘤基因(RB1基因)的两条等位基因同时失活所致，分遗传型（30%～40%）和非遗传型（60%～70%）两种方式。遗传型视网膜母细胞瘤病人体细胞都携带RB1基因生殖细胞性突变，85%～90%可能会发生双眼或单眼多灶型视网膜母细胞瘤，下一代子女中约有50%的机会遗传这一突变的基因，而其中的90%会患视网膜母细胞瘤［1，2］。因而，基于RB1基因生殖细胞性突变检测(遗传分型、产前与症状前基因诊断)，目前是视网膜母细胞瘤的预防与早期诊断的有效途径。为了进一步了解RB病人RB1基因的突变特点，为临床遗传检查提供更多可靠的信息，笔者应用分子生物学技术对RB病人体细胞中RB1基因进行突变位点的检测，并结合以前的工作［3］，探讨了RB1基因突变的分子生物学机制。 1 资料与方法 1.1 一般资料 共收集散发RB病人12例，4例为双眼RB，其他8例为单眼RB，年龄1～5岁；同时收集了12例无亲属关系的健康人作为正常对照组。 1.2 方法 1.2.1 DNA提取 采外周静脉血10ml，应用DNA分离试剂盒（Promega公司产品）提取全血白细胞DNA。 1.2.2 聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR） 应用美国PE 公司2400型PCR仪。参照Toguchida［4］报道的方法进行PCR引物设计。PCR反应体系：10×Buffer 2μl（含MgCl2 10 mmol/L），2×dNTP 2μl （2mmol/L）引物2μl（10mmol/L），DNA模板1μl （1mmol/L），Taq plus I DNA聚合酶0.5μl（510u/L），加双蒸水至100μl。95℃变性1min进入循环。95℃ 30s，退火