甘草酸二铵对镉中毒小鼠肝肾损伤影响实验研究.pdfVIP

，一～…。+。+、 ；、一一．塾!她…／} ·4· ，一……一一+、 论 文 ；、 ，； 、………．， 甘草酸二铵对镉中毒小鼠肝肾损伤影响的实验研究 前 言 镉(Cadmium，Cd)是人体非必需的有毒微量元素，在机体内生物半衰期 长达10一30年，是已知的最易在体内蓄积的毒物之一，具有多组织器官毒 性…。1993年被国际癌症研究协会列为4J4种人类I类致癌物之一，随着 工业发展，镉与人们Et常生活关系越来越密切，其毒性作用日益受到人们的 关注。大量资料表明，肝、肾是镉中毒的主要靶器官怛。-，目前，尚无理想特 效药物治疗镉所致的肝、肾损伤。镉引起机体损伤的确切机制尚不十分明 了，但是研究认为镉毒性与其氧化损伤关系密切∞1。 甘草是我国重要的传统中药，甘草中最主要的成分是甘草次酸，分为d 体和B体两种构型，甘草酸二铵(diarmnonium 体构型的第三代提取物，具有抗炎、抗病毒、保护肝细胞膜结构等功能而广 泛用于肝病的治疗J。近年来，有研究发现DG还具有抗脂质过氧化，提高 抗氧化酶活性的作用J。Nose等p1认为，DG是一种有效的自由基清除剂， 能消除毒物代谢过程中产生的氧自由基对脏器的氧化损伤。 综上所述，镉可致机体氧化损伤，DG则具有抗氧化作用。DG能否拮 抗镉所致的肝、肾脏氧化损伤，尚未见有相关报道。本实验使用DG预处理 动物，再通过急性染镉制造动物氧化损伤模型，检测染镉组与不同剂量DG 干预组动物肝、肾脂质过氧化指标的变化情况，并观察其病理组织学、细胞 超微结构的改变，明确DG的抗氧化作用并初步探讨其机制，为推广DG在 抗氧化损伤方面的应用提供理论依据。 实验材料与方法 1．药品与试剂 甘草酸二铵、(DG)(江苏正大天晴药业股份有限公司) ·5· 氯化镉(CdCl：2．5H：O优级纯)(上海试剂二厂，用前用去离子水配制) SOD、GSH—Px、CAT试剂盒(南京建成生物工程研究所) 硫代巴比妥酸(上海试剂三厂) 还原型谷胱甘肽(GSH)(上海政翔医用科技实业服务部化学试剂研究 所) 酚试剂(上海医疗化验所) 牛血清白蛋白(上海丽珠东风生物技术有限公司) 2．主要仪器 722S可见分光光度计(上海第三分析仪器厂) 低速大容量离心机(上海安亭科学仪器厂) 电热恒温水温箱(上海医疗器械七厂) 752紫外光栅分光光度计(上海第三分析仪器厂) ．超低温冰箱(SANYO公司，Japan) 超声波细胞粉碎机(宁波科生仪器厂) XW一80A型旋涡混匀机(上海医科大学仪器厂)、 普通光学显微镜、电子显微镜、Olympus显微照相系统。 3．实验动物及分组 昆明种雄性小鼠100只，体重18—259，由中国医科大学试验动物中心 验动物中心提供。正式实验前将小鼠驯养5d，按体重随机分为5组，每组 20只，分别为对照组，染镉组，低、中、高剂量DG干预组。其中，DG干预组 体积的生理盐水，每天一次，连续5d。于末次给药后1h，除对照组腹腔注 CdCl：溶液。染镉24h后，将所有小鼠摘眼球放血处死，摘取小鼠肝脏及双 侧肾脏，置人生理盐水中洗去血污，漓干，剥离被膜，将部分组织用玻璃匀浆 器及超声细胞粉碎机在冰浴中制备成匀浆，测定丙二醛(MDA)含量，超氧 的活力，以及组织中的蛋白含量。另取部分肝、肾组织供光、电镜检查用。 4．检测指标及方法 4．1MDA含量检测 ·6· 用硫代巴比妥法测定，分别将肝、肾组织以1：9生理盐水稀释，手动匀 浆连续10次，在冰浴中进行。取匀浆0．3ml，加入20％三氯醋酸2．5ml，加 于波长535nm处比色。 4．2SOD活力检测 rnl加入样品管 黄嘌呤氧化酶法。将10％组织匀浆稀释10倍，取0．1 中。