MicroRNA的超灵敏检测研究进展.pdfVIP

V01．38 高等 学校 化 学 学报 No．1 2017年 1月 CHEMICALJOURNALOFCHINESEUNIVERSITIES 1～11 [综合评述] doi：10．7503／cjc MicroRNA的超灵敏检测研究进展 王子月，刘 萌，张春 阳 (山东师范大学化学化工与材料科学学院，济南 250014) 摘要 综述了最新发展的MicroRNA(miRNA)分析方法，包括比色、荧光、化学发光、表面增强拉曼、单分子 检测和电化学分析，并对 miRNA检测的发展方向做了展望． 关键词 MicroRNA；超灵敏检测 ；扩增；分析方法 中图分类号 0655 文献标志码 A MicroRNA(miRNA)是一类长约为22个核苷酸(nt)的内源性非编码小分子单链RNA，普遍存在于 真核细胞中¨]．miRNA由长约70nt具有茎环结构的microRNA前体经核酸酶Dicer剪切产生 ．在细 胞增殖、分化和肿瘤发生时，通过 RNA诱导沉默复合物(RISC)的协调作用 ，miRNA可以与mRNA 的3端非编码区相互作用以降低靶 mRNA的稳定性或抑制蛋白质翻译 J，从而调控靶基因的表达．自 Lee等 在 1993年首次从线虫中发现了真正意义上的miRNA—Iin一4以来，研究者已经确定了人类基 因组中超过450种的microRNA．miRNA可以控制超过 50％人类编码基因的活性，在生物发育、细胞分 化、凋亡、增殖和免疫等生物过程中发挥着至关重要的调控作用 。。。．miRNA在人体组织和血液中的 异常表达与癌症的发生、发展和治疗反应密切相关 卜J．miRNA可作为癌症诊断和预测的生物标记 物，也可作为新药物的潜在作用靶点¨ ．因此，miRNA的超灵敏检测有助于临床早期诊断与抗癌药 物的研发．然而，由于miRNA片段小、在细胞中表达量低和序列同源性高，致使 miRNA的超灵敏检测 面临许多挑战 螺． 传统的miRNA分析方法包括Northern印迹杂交法 、微阵列分析法L2 和实时定量聚合酶链 式反应(qRT—PCR) ， 等，这些方法准确度高、应用广泛，但也存在一些不足．Northern印迹杂交 法耗时费力、灵敏度低、样品需求量大，且不能用于低丰度miRNA的测定．微阵列分析方法可用于发 现新的miRNA_2，并且可实现miRNA的多重检测，但其灵敏度较低 引、特异性较差、动态范围较窄、 芯片制作和检测费用高 且重复性差．qRT-PCR操作简单、灵敏度高 。’ ，但miRNA序列较短限制 了其逆转录环节_3引，且qRT—PCR通常需要复杂的引物设计和精确的温度控制 引．另外 ，PCR过程中 非特异性扩增也容易导致假阳性 J． 近年来，发展了许多新的miRNA分析方法，显著提高了检测灵敏度．这些方法引入了生物发 光 、酶分析 、分子信标 、深度测序 以及基于锁核酸们 和桥连链式反应 ，但依然 存在一些无法避免的缺陷．生物发光法 使用生物发光蛋 白Renilla荧光素酶作为标记物，操作简 单 ，但其分析原理基于发光信号的减弱．酶分析法 具有信号放大效果好的优点，但特异性和灵敏度 相对较低．深度测序 可用于快速定量分析miRNA的绝对水平，但是检测成本较高．基于锁核酸和桥 连链式反应的分析方法需要固定／分离步骤 和设计复杂的DNA探针 ，限制了其应用． 由于miRNA长度短且丰度低，需要引入信号放大来提高miRNA检测的灵敏度．研究者先后将杂 交链式反应(Hybridizationchainreaction，HCR)、滚环扩增(Rollingcircleamplification，RCA)及链置换 扩增 (Stranddisplacementamplification，SDA)等扩增反应与 比色分析 枷J、荧光 4【l1卯 、化学发 收稿 日期 ：2016—08一l8．网络出版 日期：2016-12—09． 基金项 目：国家杰出青年科学基金(