干扰素的工艺制备流程推广.pptVIP

（5）相对分子量测定 还原型SDS，加样量不地域微克，同时用已知相对分子量的蛋白标准系列做对照，以迁移率为横坐标，相对分子量的对数为纵坐标作图，计算相对分子量。与理论值比较，误差不得高于10%。 （6）残余外源性DNA含量测定 用放射性核素或生物素探针法测定，每剂量中残余外源性DNA应低于100pg。 （7）残余血清IgG含量测定 在应用抗体亲和层析法作为纯化方法时必须进行此项检定。 （8）残余抗生素活性测定 半成品中不应有抗生素活性存在。 （9）紫外光谱扫描 检查半成品的光谱吸收值，最大吸收值应在280±2纳米。 （10）肽图测定 用CNBr裂解法，测定结果应符合干扰素的结构，且批与批之间应一致。 （11）等电点测定 等电聚焦电泳。 （12）除菌半成品应做干扰素效价测定、无菌试验和热源质试验。 成品检定 （1）物理性状 冻干品白色或微黄色疏松体，加入注射水后不得含有肉眼可见不溶物。 （2）鉴别试验 应用ELISA或中和试验检定。 （3）水分测定 用卡氏法，应低于3%。 （4）无菌试验 同半成品。 （5）热原质试验 同半成品检定。 （6）干扰素效价测定 同半成品检定，效价不应低于标示量。 （7）安全试验 取体重为350-400克豚鼠3只，每只腹侧皮下注射量为成人每千克体重临床使用最大量的3倍，观察7天，若豚鼠局部无红肿、坏死、总体重不下降，说明成品合格。 取体重18-20克小鼠5只，每只尾静脉注射剂量按人每千克体重临床使用最大量的3倍，观察7天，若动物全部存活，说明成品合格。 4 国内基因工程药物产业发展状况 我国的生物技术药物却一直苦于缺乏自主创新的产品，绝大多数上市药物为仿制药，创新药物的开发一直未能打开局面。 一种新药从研发到投放市场，投入大约为30亿~60亿美元。 存在的问题：（1）同种产品生产厂家过多，造成市场恶性竞争， 严重影响产业的健康发展。（2）融资渠道单一、产业发展资金不足。（3）医药市场竞争无序，行业不正之风严重。（4）企业管理相对滞后，技术兼经营型人才匮乏。 基因工程药物 --干扰素的制备 1 什么是干扰素 概念(interferon,IFN)：机体免疫细胞产生的一类细胞因子，是机体受到病毒感染时，免疫细胞通过抗病毒应答反应而产生的一组结构类似、功能接近的生物调节蛋白。 根据分子结构和抗原性的差异分为α、β、γ、ω等4个类型。 1.1天然干扰素的分类 1. 根据来源、基因序列和氨基酸组成分类 ◆ I 型干扰素：IFNα、IFNβ、IFN τ、IFN ω 来源：白细胞、成纤维细胞、病毒感染的组织细胞等 功能 ：抗病毒感染、抗肿瘤生长 、免疫调节(较弱） 其中IFN-α为多基因产物，有23种以上的亚型。 ◆ II 型干扰素：干扰素γ（IFN?) 来源：活化的T细胞和NK细胞产生 功能：免疫调节 提高单核巨噬细胞、树突状细胞的抗原提呈能力 增强Tc细胞和NK细胞的杀伤活性 抑制TH2细胞形成，下调体液免疫应答 趋化作用 抗病毒和抗肿瘤作用（次要） 2. 根据动物来源确定分类 人干扰素（HuIFN），小鼠干扰素（MuIFN）。 不同来源的干扰素 1.2 重组干扰素的临床应用 广谱抗病毒活性（rhuIFNα） 慢性乙型、丙型、丁型肝炎；疱疹、病毒性角膜炎。 直接抗肿瘤活性（rhuIFNα） 毛细胞和慢性髓样白血病、 Kaposi肉瘤、非霍奇金淋巴瘤。 免疫调节活性——治疗慢性肉芽肿瘤（rhuIFNγ） 多发性硬化症 rhuIFNβ 2 基因工程大肠杆菌发酵生产工艺 干扰素生产工艺路线 上市产品：重组人干扰素rhuIFN 1986，rhuIFNα-2a， rhuIFNα-2b； 1990，rhuIFNγ-1b；1993，rhuIFNβ-1b； 2001－2002： PEG化IFN，PEG-Intron, Pegasys 表达产物：无糖基化，N-met，无活性包涵体 工艺特点：发酵过程，随后变性、复性过程。 基因工程大肠杆菌发酵生产工艺: 目的基因的分离 克隆载体 目的基因与克隆载体的体外重组 → 重组体导