脑垂体腺苷酸环化酶激活肽对体外培养雄性吴郭鱼性腺 - 大叶大学.pdfVIP

腦垂體腺苷酸環化酶激活肽對體外培養雄性吳郭魚性腺蛋白質表現之 二維電泳分析 Analysis of In Vitro Protein Expression in the Gonads of Male Tilapia (Oreochromis mossambicus) after Administration of Pituitary Adenylate Cyclase Activating Polypeptide by Two-Dimension Gel Electrophoresis 1∗ 1 1 1 2# 1# 邱洪磬 陳建豪 劉景堯 周承翰 唐品琦 黃尉東 1大葉大學分子生物科技學系 (彰化縣大村鄉學府路 168 號) 2 國立中興大學動物科技學系 (台中市南區國光路250 號) 1#kater@mail.dyu.edu.tw; 2#pctang@dragon.nchc.edu.tw 摘要 魚類及哺乳類透過下丘腦-腦垂體-性腺軸 (hypothalamus-pituitary-gonadal axis ，HPG axis) 調控其性 腺發育、配子生成 (gematogenesis) 與成熟、第二性徵 (secondary sex characteristics) 表現及性轉換 (sex reversion) 等功能。而腦垂體腺苷酸環化酶激活肽 (pituitary adenylate-cyclase activating polypeptide ， PACAP) 為一種神經胜肽，其能使細胞內之 cAMP 濃度增加，亦能調節生物體之各項機能 ，本研究室發 現其存在吳郭魚 (tilapia, Oreochromis mossambicus) 之性腺中。而吳郭魚為台灣養殖漁業中之重要經濟魚 種，然目前對其繁殖過程之內分泌蛋白質調控機制研究仍偏少，因此本試驗以蛋白質體學 (proteomics) 方 式分析經體外培養吳郭魚精巢受PACAP 誘導處理後其蛋白質之表現並探討其與繁殖之相關性。性成熟之 吳郭魚精巢經8 小時預培養 (Pre-Culture) 後添加PACAP 、Forskolin 、H89 及共同添加 (PACAP+Forskolin) 藥劑等處理組培養2 小時，並以未添加任何藥劑者(新鮮組織 [Fresh] 、Pre-Culture 及Control) 為對照組， 續以二維電泳分析比較其蛋白質之表現。結果顯示精巢精PACAP 處理後其蛋白質點之表現數量顯著高於 Control 及添加H89 組別，但於其他處理組則無顯著差異。目前結果證實吳郭魚精巢蛋白質於體外培養確 實可受PACAP 而影響其表現，若能進一步鑑定其差異性蛋白質身份，了解其調控路徑，則此研究結果將 助於釐清魚類繁殖過程之內分泌蛋白質調控機制，並對繁殖相關研究及漁業發展極具助益。 關鍵字： 腦垂體腺苷酸環化酶激活肽、吳郭魚、性腺、蛋白質體學、二維電泳 前言 脊椎動物於發育及生長過程，包括發身(puberty) 、成年期(adulthood) 及衰老過程 (aging) 之生殖系 統中，主要由下丘腦-腦垂體-性腺軸 (hypothalamic-pituitary-gonadal axis, HPG axis) 路徑所共同調控，且 為脊椎動物體內普遍之生殖週期調控軸。下丘腦 (hypothalamus) 位於丘腦 (thalamus) 下方，除受體內因 素影響外，亦受周遭環境因子如光週期 (photoperiod) 、溫度變化、季節轉換及群居狀態等刺激而分泌促 性腺激素釋放素 (gonadotropin-releasing hormone, GnRH) ，經由循環系統運送至腦垂體前葉 (anterior pituitary gland) ，與促性腺 (gonadotrope) 上之受體 (receptor) 結合並刺激如濾泡刺激素 (follicle-stimulating hormone, FSH)