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几种紫菜种质资源遗传多样性的RAPD 分析 陈 骁，左正宏，姚继承，陈奕欣 (厦门大学 生命科学学院,福建 厦门361005) 摘要：用随机多态DNA （RAPD）标记方法对 11 个紫菜(Porphyra )样品进行遗传多样性 检测，从46 个随机引物中筛选出27 个有效引物，共扩增出282 条DNA 带，其中多态位 点224 个，占79.4% 。用类间平均链锁法对各样品间的遗传距离进行聚类分析。结果显示， 2 个条斑紫菜之间的亲缘关系很近，遗传相似系数达98.1% ，和坛紫菜的亲缘关系较远； 坛紫菜不同样品间的遗传相似系数在75.8%~90.6%之间，表明坛紫菜种质资源具有丰富的 遗传多样性，是良种选育的遗传基础。 关键词：随机多态DNA （RAPD）； 紫菜(Porphyra ) ； 遗传多样性 中图分类号：Q953 文献标识码：A 文章编号：1000-3096(2005)04-0076-05 紫菜(Porphyra )是中国三大经济型海藻之一，其 1.2.1 基因组DNA 的提取与纯化 [1] [5] 产值居于海藻之首 。目前，中国紫菜养殖品种主要 采用郭宝太等 的方法经本实验室改进后，用于 有条斑紫菜和坛紫菜。长期以来，坛紫菜栽培者主要 基因组 DNA 的提取与纯化。在BECKMAN-DU640 用混杂的野生种作为苗源,使紫菜的产量和质量稳定 核酸蛋白分析仪上测定DNA 的纯度和浓度,通过琼脂 性差,影响了这一产业的发展。目前对紫菜种质鉴定 糖电泳检测DNA 的完整性，-20℃保存备用。 的方法还主要是采用传统的形态学方法,而形态特征 1.2.2 基因组DNA 的RAPD 扩增 总是会受生长环境的影响,如温度、盐度、营养盐水 反应总体积 20 μL，其中无菌双蒸水 9 μL,2.5 平、潮汐和海流等。所以仅靠叶状体的形态特征很难 mmol/L dNTP 2 μL，引物100 pmol/L 1 μL，10 ng/ μL 准确判断种质的优劣。当前，种质问题是开发和利用 的DNA 模板4 μL，10×buffer 2 μL，1.5 mmol/L MgCl 2 μL, Taq 酶1.0U。扩增反应程序：94 ℃3 min 紫菜资源的主要限制因素之一，因此加强紫菜种质资 2 源的研究就显得非常重要。 预变性；94℃1 min, 36℃ 2 min, 72 ℃2 min,35 个循 环；最后 72 ℃延伸 5 min 。PCR 仪型号为美国产 近年来发展起来的随机多态DNA （RAPD）分子 ThermoHybaid ，PCR 产物用 1.2﹪琼脂糖电泳检测， 标记技术,是以 PCR 为基础的有效的种质鉴定手段, TM 用BIO-RAD 公司生产的Fluor-S Multilmager 凝胶 由于它具有多态性高,相对快速、简便和经济, 已广泛 成像系统扫描。 用于动植物种内品系区分、种间或种内的亲源关系和 遗传变异水平的检验、杂种优势的鉴定等。也已开始 [1~4] 在紫菜种质鉴定研究中应用 。本研究选取2 个较 有代表性的坛紫菜栽培品种和 2 个条斑紫菜栽培品 种, 以及7 个野生坛紫菜样品，拟通过RAPD技术对其 种质资源的遗传多样性进行筛查,为进一步筛选优良 品种及分子标记辅助育种提供分子生物学依据。