脊尾白虾exopalaemoncarinicaudaα巨球蛋白-渔业科学进展.pdfVIP

第36 卷 第2 期 渔 业 科 学 进 展 Vol.36, No.2 2 0 1 5 年 4 月 PROGRESS IN FISHERY SCIENCES Apr., 2015 DOI: 10.11758/yykxjz / 脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda) 2- 巨球 蛋白cDNA 全长的克隆和表达分析* 1,2 1① 3 1 1 王有昆 刘 萍 段亚飞 李吉涛 李 健 (1. 农业部海洋渔业可持续发展重点实验室 中国水产科学研究院黄海水产研究所 青岛 266071 ； 2. 上海海洋大学水产与生命学院 上海 201306 ；3. 中国水产科学研究院南海水产研究所 农业部南海渔业资源开发利 用重点实验室 广州 510300) 摘要 根据本实验室前期获得的脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda) α2- 巨球蛋白基因EST 序列，采 用cDNA 末端快速扩增(Rapid amplification of cDNA end, RACE)技术克隆获得脊尾白虾α2- 巨球蛋白基因 cDNA 全长，命名为Ecα2M 基因。该基因全长4823 bp ，由4413 bp 的开放阅读框、64 bp 的5端非编码 区以及346 bp 的3端非编码区组成。开放阅读框编码1470 个氨基酸，分子量为163.0 kDa，理论等电点 为5.03。序列分析显示，Ecα2M 序列N 端含有23 个氨基酸组成的信号肽。同源性分析显示，脊尾白虾 Ecα2M 氨基酸序列与罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii) α2M 的同源性最高，达到80%。荧光定量PCR 分析结果显示，Ecα2M 基因在血细胞、肝胰腺、肌肉、鳃、卵巢、眼柄、胃及肠中均有表达，其中在血 细胞中的相对表达量最高。感染鳗弧菌和WSSV 后，脊尾白虾血细胞中Ecα2M 的相对表达量于6 h 达 到最大值且显著高于对照组(P0.05) ，肝胰腺中Ecα2M 的相对表达量于3 h 达到最大值且显著高于对照 组(P0.05) ，相对表达量变化具有明显的时间差异性。 关键词 脊尾白虾; α2- 巨球蛋白; 基因克隆; 基因表达 中图分类号 S917 文献标识码 A 文章编号 2095-9869(2015)02-0063-08 丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serine protease inhibitor, 血液和其他体液内环境的稳定，在免疫和疾病发生过 SPI)是对丝氨酸蛋白水解酶具有抑制活性的一类蛋 程中起到了至关重要的作用(鲍玉洲等, 1996; 梅承芳 白质的总称，在凝血、补体活化、细胞迁移、感染等 等, 2002; 施志仪等, 2008) 。当机体发生炎症时，α2M 一系列重要生理病理过程中发挥关键性的调控作用， 被大量合成并进入组织，通过与组织释放的过量蛋白 是生物体内免疫系统的重要组成部分，有利于维持机 酶结合，进而达到清除过量蛋白酶、防止组织被破坏 体内环境的稳定(Simser et al, 2001; Ye et al, 2001; 的目的；此外，α2M 还可以与病原体和寄生虫释放的 Gettings, 2002; van Gent et al, 2003) 。根据其功能、结 毒素以及蛋白酶相结合，并将其清除，从而达到降低 构特点以及结合机制可以将SPI 家族分为以下4 种： 宿主受到的伤害以及增强宿主抗病力的目的(鲍玉洲 Kazal 型、Kunitz 型、α-巨球蛋白型和Serpin 型(Kanost, 等, 1996; 梅承芳等, 2002; Ma et al, 2010) 。 1999)。α2- 巨球蛋白(alpha2-Mac