芍药甘草附子汤对弗氏完全佐剂关节炎大鼠血清IL-1β、PGE-%2c2-水平的影响.pdfVIP

2．4取材 连续灌胃给药2l天，于给药第2l天晚，各组大鼠禁食不禁水，次日取材。用25％乌拇坦按 0．4ml／lOOg体重标准对大鼠进行腹腔麻醉¨1，将大鼠固定，切开腹腔，用于术器械分开腹腔脏器， 待测。取左后足踝关节，用生理盐水冲洗后，浸泡于福尔马林中固定备用。 2．5各项指标测定方法 2．5．1大鼠左后足踝关节病理切片操作程序： (1)取材固定：取左后足踝关节，用生理盐水冲洗后，置10％福尔马林中固定。 每一级酒精脱水时间约为4一--8小时。 (3)透明：二甲苯透明，二甲苯I、II透明各60min。， (4)浸蜡与包埋。 (5)用石蜡切片机切片，组织切片厚度为5微米。 (6)脱蜡到水： ①载片浸入二甲苯IlOmin，洗去石蜡。 lOmin。 ②载片浸入二甲苯II ③无水酒精5min，洗去二甲苯。 5min。 ④无水酒精II ⑤按顺序入95％、80％、70％、50％酒精中各5min，使之逐步下行到水。 ⑥蒸馏水中洗5min。 (7)染色： ①进入苏木精溶液染色3inin。 ②自来水洗去浮色。 ③1％盐酸酒精分色，洗去不应上色(如细胞质)部分。 ④自来水冲洗半小时以上。 ⑤0．5％-1％伊红溶液复染1～lOmin，使胞质染成红色。 ⑥按顺序经95％酒精I、II中脱水兼分化伊红颜色各lmin。 ⑦入无水酒精中彻底脱水45min(I、II各5min)。 (8)透明：先入二甲苯IlOmin：再入二甲苯II彻底透明lOmin。 (9)封固：用中性树胶封固。在载玻片上加1～2滴树胶，加盖玻片封固。 ∞用光镜观察，摄片。 2．5．2酶联免疫法测定其血清中IL—lB水平的操作方法： (1)腹主动脉取血后，在离心机上以2000r／min离心10分钟，取血清。 (2)将加入血清的反应板在37℃温育60分钟。 (3)取出反应板后，倒出没有结合的待测样品，用洗涤液将反应板充分洗涤5次，向滤纸上拍 干。 u (4)每孔加入酶标抗体工作液100l，将反应板置37。C90分钟，取出反应板，倒出酶标抗体 工作液，用洗涤液将反应板充分洗涤5次，向滤纸上拍干。 u (5)每孔加入底物工作液i00l，放在37℃暗处反应。 u (6)在每孑L)Jn入i001终止液混匀。 (7)在450nm处测吸值。 2．5．3酶联免疫法测定其血清中PGE：水平的操作方法： u1 (1)每孑L)Jn入已稀释的样品血标准品各100 (2)将反应板置于37。C温育30分钟 (3)甩尽板中液体，用应用洗涤液进行洗涤，每次停留30秒，在纸上拍干，重复操作5次 ll1 (4)每孔加入酶标偶合液i00 (s)将反应板置于37℃温育30分钟 (6)甩尽板中液体，用应用洗涤液进行洗涤，每次停留30秒，在纸上拍干，重复操作5次 u (7)每孔加底物A、底物B各501，置37C恒温箱反应15分钟 H (8)每孔加终止液50l，于450nm处读0D值 2．6统计方法 所有实验数据应用SPSSIO．O统计软件进行处理。各组大鼠血清IL-IB、PGE：水平的实验结 有显著性差异。 结果与分析 l一般情况观察 造模大鼠于足垫注射诱发关节炎期间，活动减少，精神状态、饮食稍差，体重有所下降；空 白组大鼠身体健壮，饮食正常，体重自然增加。给药期间，各组大鼠饮食如常，体重增加，雷公 藤治疗组大鼠有不同程度的腹泻。 2关节肿胀的观察 注射弗氏完全佐剂的第二天，造模大鼠右后足(注射足)开始发红、肿胀、表面皮肤绷紧发 亮，大鼠活动明显减少，并伴有跛行或拖腿现象，但红肿局限于注射足，并于2～3天后肿胀逐渐 减轻。造模后第8天可见部分大鼠注射足再次肿胀，第lO天出现四肢对称性趾间关节肿胀，后足 先发病，几天后扩展至前足并逐渐累