蛋白质药物-液质分析.pdf

LCMS for Biopharm Analysis 蛋白质药物 液质分析 • 完整蛋白表征 • ADC • 肽图及修饰 • 寡糖分析 • 二硫键解析 • 单抗代谢定量 • 残留宿主细胞蛋白鉴定与定量 Orbitrap — 最稳定的超高分辨质谱 工欲善其事，必先利其器 《论语·卫灵公》 • 完整蛋白质及 Lysine – ADC 分析 ········································ 1 • 肽图及修饰 ········································································ 5 • 糖基化 ················································································ 9 • 二硫键 ·············································································· 17 • 蛋白质药物代谢 ································································ 21 • 残留宿主细胞蛋白 ··························································· 28 • Cystine - ADC ··································································· 31 • Orbitrap 特点简介 ····························································· 36 整体水平蛋白质药物的质谱表征 整体分子量测定是蛋白质药物产品 （如单 雾离子源实现蛋白离子化，离子化的蛋白进 抗）研发与质控中最常进行的分析项目，而 入质谱，产生原始质谱数据，数据将通过去 ESI-Orbitrap MS （电喷雾离子化-静电场轨道阱 卷积软件计算出蛋白质的质量。与TOF原理完 质谱）已经成为最常用的测量方法之一。而 全不同，Orbitrap采用傅里叶变换进行离子质 另一种常见质谱技术MALDI—TOF （基质辅助 量分析，在低质荷比区域，其分辨率可达40 激光解析-飞行时间质谱）无法进行此项分析， 万以上，而TOF 分辨率仅为数千。在2000- 其原因是由于：在MALDI条件下，蛋白将主要 4000m/z范围，两者分辨率近似，但由于原理 形成单电荷离子，而目前最尖端的TOF型质谱 的不同，Orbitrap更易于实现基线分离——也 在高质荷比范围分析中 （10万m/z 以上范围）， 就是说即使在分辨率一致的情况下，相比TOF ， 分辨率也仅有数千。因此当面对质量巨大的 Orbitrap可获得更为清晰的质谱原始数据 （图2 ） 蛋白质药物离子时 （如单抗分子量近15万）， [1-3] 。高质量的原始数据为分析结果提供了保 TOF分辨率明显不足，不但无法进行分子量的 证。在完整单抗分析中，Orbitrap准确度一般 精确测定，甚至连单抗的糖型也根本无法辨 为10ppm 内 （以单抗分子量15万计算，10ppm 别 （图1）。在ESI （电喷雾离子化）条件下， 约相当于1.5Da ），而TOF 为20-30ppm左右。 蛋白分子将携带多电荷，以单抗为例，其将 Orbitrap不仅准确度高，更由于在硬件中伴有 携带40-70 个左右的电荷，信号落入2500- 离子蓄积设计，而使灵敏度更高 （TOF质谱受 3500