基于荧光染料PicoGreen和核酸适配体的伏马毒素B1检测方.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 桂海娈 等/基于荧光染料PicoGreen 和核酸适配体的伏马毒素B1 检测方法 1393 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn September 25, 2015, 31(9): 1393−1400 DOI: 10.13345/j.cjb.140590 ©2015 Chin J Biotech, All rights reserved 农业生物技术 PicoGreen B1 * * 桂海娈 ，金庆日 ，张亚军，王晓杜，杨永春，邵春艳，程昌勇，卫芳芳，杨杨，杨梦华， 宋厚辉 311300 , , , . PicoGreen B1 . , 2015, 31(9): 1393–1400. Gui HL, Jin QR, Zhang YZ, et al. Development of an aptamer/fluorescence dye PicoGreen-based method for detection of fumonisin B . Chin J Biotech, 2015, 31(9): 1393–1400. 1 摘 要: 伏马毒素 B1 是主要存在于玉米及玉米制品中的一种可以引起癌症的霉菌毒素。针对霉菌毒素精准检 测技术的开发对于保障食品安全至关重要。本研究利用核酸适配体与伏马毒素 B1 结合后不再结合其互补核酸 序列的选择性以及 PicoGreen 与双链 DNA 结合的特异性，开发了一种快速检测伏马毒素 B1 的适配体方法。 PicoGreen 与双链DNA 反应 15 min 后激发产生的荧光达到峰值 (激发波长为480 nm ，发射波长为520 nm) 。 该方法的最低检测限为0.1 μg/L (0.1 ppb) ，线性范围为0.1−1 μg/L (0.1−1 ppb)，整个检测流程可在40 min 内完 成。特异性试验显示伏马毒素B 适配体与黄曲霉毒素B 、赭曲霉毒素、桔毒素和玉米赤霉烯酮等常见霉菌毒 1 1 素无交叉反应。结果表明适配体方法与基于抗体的检测伏马毒素 B1 商品化 ELISA 试剂盒相当，Kappa 值为 0.857 。由于核酸适配体比抗体成本低，检测时间短，因此基于核酸适配体的方法比基于抗体的ELISA 方法更 具有推广应用价值。 : 伏马毒素 B 1 ，核酸适配体，荧光染料，PicoGreen ，检测 Received: November 30, 2014; Accepted: January 30, 2015 Supported by: National High Technology Research and Development Program of China (863 Program) (No. 2012AA101602), Project Supported by Zhejiang Province University Student Science and Technology Innovation Plan (Fresh Talent Program) (No. 2014R412040), Zhejiang AF University Talent Starting Program (Nos. 2011FR025, 2013FR012, 2012FR047, 2013FR076, 2013FR054). Corresponding authors: Houhui Song. Tel: +86