农杆菌介导AtPCS1基因转化苜蓿.PDF

维普资讯 第 43卷第 6期 兰州大学学报 (自然科学版 ) V0l1．43NO．6 2007年 12月 JournalofLanzhouUniversity(NaturalSciences) Dec．2007 文章编号：0455—2059(2007)06—0033—06 农杆菌介导AtPCS1基因转化苜蓿 王呜刚L2，任小换 ，李志忠 ，李雪雁 ，吴亦亮 ，陈 亮 f1．兰州理工大学生命科学与工程学院，甘肃 --}I730050； 2．厦门大学 生命科学学院，福建 厦门 361005) 摘 要：利用RT—PCR扩增拟南芥螯合肽合成酶(AtPCS1)基因全序列．进一步构建AtPCS1的植物表 达载体pBI121一AtPCS1，转化农杆菌EHA105；然后用转化的农杆菌EHA105以叶盘法侵染苜蓿甘农 一 号叶片，在50Ing／LKan的筛选压下，经过约80~100d的筛选，获得57棵再生苗．随机取其中9棵再 生苗进行PCR检测，其中6棵为阳性．初步鉴定表明AtPCS1基 因已整合到苜蓿基因组 中． 关键词：植物螯合肽合成酶；植物表达载体；苜蓿；转化；鉴定 中图分类号：Q78 文献标识码：A Agrobacterium—mediated transformation of AtPCS1intoM edicago sativa．L WANG M ing—gang ，REN Xiao—huan ，LIZhi—zhong， LIXue—yan ， Yi—liang2 CHEN Liang2 ， (1．CollegeofLifeSciencesandEngineering，LanzhouUniversityofTechnology，Lanzhou730050，China； 2．SchoolofLifeSciences，XiamenUniversity,Xiamen361005，China) Abstract：Thefulllengthof PCS1genewasamplifiedbyRT—PCRfromArabidopsisthaliana(ecotype Columbia)．Furthermore．AtPCS1plantexpressionvectorpBI121一AtPCS1wasconstructedandtransfered intoAgrobacterium EHA105andA PCS1genewastransferred intoalfalfaGannongNo．1by leafinfection method．Transgenicalfalfaplantshavebeenregeneratedunderthe50mg／LKanconcentrationpressure after80~100days．SixputativetransgenicplantswerescreenedbyAtPCS1一specificPCR inninerandomly chosensamples．TheprimaryrcsultsshowedthattheAtPCS1hasbeentransferredintoalfalfa． Key words：phytochelatin synthase；plantexpressionvector；alN1N；transformation；identify 环境中重金属 的毒性成为影响环境和人类健 提高植物对重金属 的耐受和积累[5-6】．含有过量 康 的一个主要 问题 11【】．在重金属离子的诱导下， 表达PC合成酶基 因的转基因植株可作为理想的 植物细胞 内的植物螯合肽合成酶