饮用水中细菌总数及大肠杆菌群的测定论文答辩.doc

石河子大学动物科技学院本科教学实习论文 饮用水中细菌总数及大肠杆菌群的测定 院 （系）： 动物科技学院 专 业： 动物医学 学 号： 2007133503 姓 名： 王 雪 玫 新疆 石河子 2009.6. 28 桶装纯净水的细菌总数的测定 摘要：本实验用稀释平板计数法测定水中细菌总数，利用乳糖发酵试验证实并检测大肠杆菌群。通过对不同品牌的桶装饮用水进行微生物指标测定，并将测定结果与国家饮用水卫生标准作比较，结果证实样品中细菌总数与大肠杆菌数均超出国家饮用水卫生标准。 关键词：饮水机 细菌总数 平板记数 大肠杆菌 近年来，桶装饮用水的消费市场越来越大，其卫生质量受到人们的广泛关注。各生产厂家虽采取了种种除菌、杀菌工艺及较严格的无菌操作程序，但市售桶装饮用水的微生物超标率仍居高不下，尤其是菌落总数超标最为严重。为此，我们对2009年度从桶装天然矿泉水进行了细菌菌相分析研究，以供矿泉水生产工艺的改进及卫生监督监测工作参考。 目前，桶装饮用水微生物指标共涉及3项国家强制性标准，即《瓶(桶)装饮用纯净水卫生标准》(GB 17324—2003)、《瓶(桶)装饮用水卫生标准》(GB 19298—2903)、《饮用天然矿泉水》(GB 8537—1995)。 相对一般食品而言，桶装饮用水的微生物指标要严得多，加之其本身不具自净或持续消毒能力，使得生产、运输、贮存过程中的任何一道污染都有可能造成产品微生物的超标。 水源中大肠菌群的数量，是直接反映水源被人畜排泄物污染的一项重要指标。目前，国际上已公认大肠菌群的存在是粪便污染的指标。因而对饮用水必须进行大肠菌群的检查。 水中大肠菌群的检验方法，常用多管发酵法和滤膜法。多管发酵法可运用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要时间长。滤膜法仅适用于自来水和深井水，操作简单、快速，但不适用于杂质较多、易于阻塞滤孔的水样。由于检测的水样较为洁净，水样较少，故本实验采用多管发酵法。 1 材料与方法 1.1. 材料 1．1．1 分别采集我院主楼的微生物实验办公室、党政办公室、农学院学生办公室的饮水机中水样各250ml，分别标记为水样①、②、③。 1．1．2 制作普通肉膏蛋白胨琼脂培养基、单料乳糖培养基、双料乳糖培养基、伊红美兰琼脂培养基等培养基。几种培养基均在制作好后放37℃ 培养24—48h，以证实无细菌污染。 1.1.3 灭菌三角烧瓶，灭菌盐水瓶，灭菌培养皿，灭菌吸量管，灭菌试管，灭菌生理盐水，电子天平等。 1.2.1.1 水样①、②、③及各稀释度。 1.2 菌落总数 1.2 .1 以无菌操作方法吸取水样1ml，注入盛有9ml灭菌生理盐水的试管中，混成1：10稀释液。吸取1：10稀释液注入盛有9ml灭菌生理盐水的试管中，混成1：100稀释液。按同法稀释成1：1000稀释液，如此递增稀释一次，必须更换一只1ml灭菌吸管。 1.2.3 用灭菌吸管吸取水样的原液和按不同稀释度稀释过的水样各1ml，注入灭菌平皿内，倾注约已溶化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验时做一个平行接种，同时用另一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。待冷却凝固后，翻转平板，使底面向上，置于36℃培养箱内培养48小时，进行菌落记数，即为1ml中的菌落总数。 1.2 总大肠菌群 1.2.2 方法 1.2.2.1 乳糖发酵实验 1.2.2.1.1 以无菌操作方法吸取水样10ml接种到10ml双料乳糖蛋白胨培养液中，取1ml水样接种到10ml单料乳糖蛋白胨培养液中，另取1ml水样注入到9ml灭菌生理盐水中，混匀后吸取1ml注入到10ml单料乳糖蛋白胨培养液中，每一稀释度接种5管。 1.2.2.1.2 将接种管置36℃培养箱内培养24小时，如有产气产酸者，则按下列步骤进行。 1.2.2.1.3 将产气产酸的发酵管分别转种在伊红美兰平板上，于36℃培养箱内培养18-24小时，观察菌落形态，挑取深紫色、具有金属光泽的菌落作革兰氏染色、镜检和证实实验， 1.2.2.2 证实实验 1.2.2.2.1 将细菌接种到乳糖蛋白胨培养液，置36℃培养箱内培养24小时，有产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在。 鉴定结果 结果 表 1 稀释度的选择及细菌数报告方式 稀释度及菌落数 两稀释度之比 菌落总数/（cfu/g或cfu/mL） 报告方式（菌落总数）/（cfu/mL或cfu/g） 原样 10-1 10-2 10-3 1 2176 168 35 3 7.6 10356 1．04*104 稀释度及菌落数 两稀释度之比 菌落总数/（cfu/g或cfu/mL） 报告方式（菌落总数）/（cfu/mL或cfu/g