小鼠骨髓干细胞向肝细胞转化的体外实验研究.PDFVIP

·479· 主生压胆处型苤查；!!!生!旦筮!!鲞箜!塑垦垄也』旦!P!!!!i!i!!z墨坠堡!』坠!；!!!!y!!：!；!堕!：! ·实验研究· 小鼠骨髓干细胞向肝细胞转化的 体外实验研究 施晓雷 丁义涛仇毓东 谢婷朱章华李雷 陈蕾蕾 FGF-4和30 【摘要】 目的建立以30ng／ml ng／mlOSM为主的诱导培养体系，研究体外骨髓 FGF，30 干细胞向肝细胞的转化过程中细胞形态、结构、功能的变化。方法建立以30ng／ml ng／ml OSM为主的小鼠骨髓干细胞诱导培养体系。观察细胞形态和数量的变化；RT-PCR、Westernblot、免 疫荧光染色检测肝细胞特异性标记物的表达；通过PAS糖原染色、白蛋白ELISA、尿素合成试验，检 测细胞的合成和代谢功能。结果诱导12d，观察到多极性的肝细胞样细胞，且逐渐增多、集落不断 增大。在诱导过程中，不同的时间点可以分别检测到HNF-3prnRNA、ALBmRNA、CKl8mRNA、 TTRmRNA、G6一PasemRNA和TATmRNA的表达。诱导21d，细胞表达HNF-313、ALB、CKl8蛋 白；免疫荧光定位示ALB表达于胞浆和胞膜，而CKl8表达于胞浆。诱导21d，细胞胞浆内可见红染 的糖原颗粒；在诱导过程中，不同的时间点检测到细胞分泌ALB、合成尿素的量的变化。结论我们 建立的以30 FGF、30ng／mlOSM为主的诱导培养体系，可以有效地促进骨髓干细胞体外定向 ng／ml 转化为肝细胞。 【关键词】骨髓干细胞；肝细胞；分化；诱导 Invitro ondifferentiationofmousebonen越uTowstemcellsinto SHIXiaolei，DING study hepatocytes Col— Yitao，QIUYudong，eta1．DepartmentofHepatobiliarySurgery，GulouHospital，Medical 210008，P．R．China legeofNanjingUniversity，N矗巧ing Toestablishthedirecteddifferentiationmedia 30 FI引孓4 ng／ml [Abstract]Objective including and OSMandrevealthedifferentiationofbonemarrowcells(BMSCs)into 30ng／ml hepatocytesby examinationanddeterminationofmRNA andcellfunc- morphologieal expression，proteinexpression tion．MethodsThemouseBMSCswereculturedinthedirecteddifferentiationmedia FGF-4 including differentiationofBMSCSwereidentified． and ofthe formdirected OSM．Morphologyhepatocytes wastestedRT—PCRandthe