核酸序列依赖扩增联合分子信标对曲霉菌感染的检测效果.PDFVIP

第３５卷第１５期 第　三　军　医　大　学　学　报 Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．１５ ２０１３年８月１５日　　　　　　　　　　 Ｊ　Ｔｈｉｒｄ　Ｍｉｌ　Ｍｅｄ　Ｕｎｉｖ 　　　　　　　　　　 Ａｕｇ．１５　２０１３ １５８３ 文章编号：１０００５４０４（２０１３）１５１５８３０４ 论著 核酸序列依赖扩增联合分子信标对曲霉菌感染的检测效果 １ ２ １ １ １ 王立朋 ，何云燕 ，夏　云 ，王慧娟 　　（４０００１６重庆，重庆医科大学附属第一医院检验科 ；４０００１３重庆，重庆市中山医 ２ 院检验科 ） 　　［摘要］　目的　建立快速、灵敏、特异的定量检测曲霉菌感染的诊断方法。方法　 以烟曲霉菌、黄曲霉菌及黑曲霉 菌的孢子配制菌液，提取ＲＮＡ后，采用核酸序列依赖扩增（ｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｂａｓｅｄａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ＮＡＳＢＡ）联合分子信标 （ｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｅａｃｏｎ，ＭＢ）技术进行荧光检测，并对该方法进行灵敏度和特异性分析。结果　 扩增过程中累计荧光量达到设 定的荧光阈值所需循环数与标本中霉菌孢子量的对数存在线性相关关系（ｙ＝－１０．７ｘ＋８１．６，ｒ＝０．９８８）。将含有梯度数 量霉菌孢子的标本提取总ＲＮＡ后进行检测，可建立相应标准曲线。该方法的灵敏度可达到１个孢子；对照菌株（金黄色 葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、热带念珠菌、新型隐球菌）与曲霉菌提取总ＲＮＡ经扩增后的产物进行 电泳分析，发现仅曲霉菌出现特异性条带。结论 　 ＮＡＳＢＡ结合分子信标检测曲霉菌具有灵敏度高、特异性强的特点，具 有潜在利用价值，有望成为曲霉菌感染的临床诊断方法。 　　［关键词］　 核酸序列依赖扩增；分子信标；曲霉菌；诊断 　　［中图法分类号］　Ｒ３７９．６；Ｒ４４６．５；Ｒ４４６．９　　 ［文献标志码］　Ａ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｏｓｉｓｄｅｔｅｃｔｉｏｎｂｙｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｂａｓｅｄａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｅａｃｏｎ １ ２ １ １ １ ＷａｎｇＬｉｐｅｎｇ，ＨｅＹｕｎｙａｎ，ＸｉａＹｕｎ，ＷａｎｇＨｕｉｊｕａｎ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ２ ＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ，４０００１６；ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＺｈｏｎｇｓｈａｎＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ，４０００１３，Ｃｈｉｎａ） 　　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　 Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｑｕｉｃｋ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，ｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｄｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｏｒｃｌｉｎｉｃａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆａｓｐｅｒｇｉｌｌｏｓｉｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　 Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｕｍｉｇａｔｅｓ，Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｌａｖｕｓａｎｄ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒｗｅｒｅｃｕｌｔｕｒｅｄ，ａｎｄｔｈｅｓｐｏｒｅｓｗｅｒｅｈａｒｖｅｓｔｅｄ．ＴｈｅｔｏｔａｌＲＮＡｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｓｐｏｒｅｓ． ＴｅｎｆｏｌｄｓｅｒｉａｌｌｙｔｉｔｒａｔｅｄＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｃｏｎｉｄｉａ（１０１ｔｏ１０６ｓｐｏｒｅｓ）ｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｂａｓｅｄ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ（ＮＡＳＢＡ）ａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｅａｃｏｎ（ＭＢ）ｐｌａｔｆｏｒｍｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｓｔａｎｄａｒｄｃｕｒｖｅ．Ｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙａｎｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｏｆｔｈｅｍｅｔｈｏｄｗｅｒｅｅｖａｌｕａｔｅｄ．Ｒ