根癌农杆菌介导的马铃薯遗传转化条件的优化.PDFVIP

维普资讯 山东农业大学学报 (自然科学版)，2002，33 (1)：∞一27 Joctr~mlof日18l1d gagriculturalUmvemity (NaturalSeieaaoe) 根癌农杆菌介导的马铃薯遗传转化条件的优化 王 丹 ，朱常香 ，郑成超 ，温孚江 (1．山东农业大学理学院．山东泰安 271018；2．山求农业大学生命科学学院．山求亲安271018；) 摘要：利用山东省广泛栽培的马铃薯品种为材料，对影响马铃薯遗传转化的抗生素浓度、农杆菌浓度、预培养时间 和共培养时间等进行了研究。结果表明：(1)卡那霉素Km浓度以 15～25me／l作为马铃薯叶圆片转化时的选择压更 合适；(2)教苄青霉素(cb)比头孢霉素Cefo更适合用于农杆菌舟导的马铃薯叶圆片的遗传转化；(3)外植体预培养时 间4d，共培养时间3d为最好；(4)菌液浓度以O日啪=0．5左右最好。上述条件的优化太大提高了马铃薯遗传转化效 率。 关键词：马铃薯：根癌农杆菌；转化 ；抗生寨 中圉分类号：$481 ．9 文葡标识码：A 文章编号：1001)一为242【002)O1一O023—05 oPm 皿Z^110foFFACIDRs FE(加 GEN脚 c豫 ^N趼 oRM棚 _oNoF p rAT0 VIAA耵 BAC玎强卫UM 1 m娅 AC S W?IGDan；zHuChang-)(ian ；z}硼 Cher~一cha02；ViT~NIFu—jian (1 c0】】 ofScience，Shand~g m m 叽T~／an271018，China~ 2．Collegeof Science， g姆 № dUmve~ity， n271018，ch ) Abstract：In thisstudy，weinvestigatedtheeffectsofantibiotics，CharacteristicsofAgrobacterium tumefaciens，the timeofprecultureandco—cultivationontheAgrobactefium —mediatedttansformationofpotato．Theresultsindicate thattheadequateconcentrationofkanamycinforselectingpotatotmnsformafionis15—25rag／L；Carbenicillinisbetter forpotatotransformafionthanCefotaxime；theadequatetimeofprecultn~ andco—culdvationis4daysand3daysre． speetively；Theoptimum concentrationofAgrobacterlum ttmaefaciensisOD600=0．5． Keywords：Potato；Agrobactefium tumefaeiens；tramformation；antibiotics 马铃薯是世界上许多地区的主要食物来源，其产量仅次于玉米、小麦、水稻，居第四位。利用常规方法 进行马铃薯育种困难较大。近些年来，人们试图利用基因工程技术探讨马铃薯品质改良。自1983年首次 通过农杆菌转化获得马铃薯再生植株至今，已有近20个马铃薯品种获得转化植株。以叶片、茎段、块茎和 试管薯为受体的 质粒转化均获得了成功。然而，马铃薯的遗传转化还存在诸多问题，如有的研究只限 于少数品种 或存在基因型的依赖性 ‘或转化频率低_8或程序复杂_5J。我国在马铃薯的遗传转化上 研究起步较晚，用中国栽培品种进行遗传转化的研究报道也很少_l·。因此，在前人研究的基础上，从当 地品种人手 ，寻找一种简单、有效的转化系统，从而促进现代遗传工程的发展是非常有意义的。 本实验以山东省广泛栽培的马铃薯品种为材料，研究了各种因素对马铃薯遗传转化的影响，建立起了 良好的遗传转化系统，为下一步用基因工程技术进行马铃薯品种改良和抗病、抗虫育种工作奠定了基础。 1 材料和方法 1．1 实验材料 本研究以马铃薯栽培品种鲁马 1号、泰山1号的无菌苗为供试材料(山