根癌农杆菌对巴戟天遗传转化的影响因素.PDFVIP

维普资讯 广 西 植 物 Guihaia 24(5)：411—413 2004年 9月 根癌农杆菌对 巴戟天遗传转化的影响因素 贺 红，林小桦，张桂芳，徐鸿华 (广州中医药大学中药学院，广东广州 510405) 摘 要：以巴戟天带节茎为材料，研究了根癌农杆菌对巴戟天遗传转化的影响因素。结果表明：外植体感染前 先进行2d预培养，对转化有一定促进作用；外植体与农杆菌共培养时间以3d为宜；乙酰丁香酮能提高转化效 率，抗性芽分化率可达 18．0 I夕植体与农杆菌共培养后延迟 4d选择，抗性芽分化率有所提高；硝酸银能抑制 外植体表面农杆菌的生长，提高GUS阳性芽的比例，硝酸银浓度 2mg／L时，GUS阳性芽 比例最高(42．9 )。 关键词：巴戟天；农杆菌；遗传转化 中图分类号：Q943．1 文献标识码：A 文章编号：1000—3142(2004)05—04l1—03 FactorsaffectingAgrobacterium。。mediatedgenetic transformationofMorindaofficinalis HE Hong，LIN Xiao—hua，ZHANG Gui—fang，XU Hong—hua (CollegeofChineseMateriaMedica，GuangzhouUniversityofTCM ；Guangzhou510405，China) Abstract：TheexplantsusedfOrtransformationwerethenodularstem segmentsfromMorindaofficinalis How．ThefactorsaffectingAgrobacterium—mediatedgenentictransformationwerestudied．Theresultswere asfollows：2-dayprecultivationenhancedshootregeneration．Adoptedtimeofcocultivationwas3d．W iththe presenceofacet0syring0neduringcocultivation，theefficiencyoftransformationcouldbeenhanced，andthere— generatedfrequencyofresistantshootroseashigh as18．0 ．Aftertheexplantswerecocultivatedwith Agrobacterium ，4-daydelayedselectioncouldstimulateshootregeneration．AgNOscouldinhibitthegrowthof strainEHA 101．AgNO3ataconcentration0f2mg／LgavethehighestfrequencyofGUS-positiveshoot(42．9 )． Keywords：Morindaofficinalis；Agrobacteriumturnefaciens；genetictransformation 巴戟天(MorindaofficinalisHow)为茜草科藤 试验 以巴戟天带节茎为材料 ，对于影响转化的一些 本植物，以肉质根人药，具有补肾壮阳、强筋骨、祛风 因素作了系统的研究，初步建立了一套根癌农杆菌 湿的功效(《中国药典》，2000)。巴戟天为广东道地 介导的外源基因转人方法。 药材，四大南药之一(徐鸿华，2001)。目前影响巴戟 天产量和品质的主要因素之一是病虫的危害，解决 1 材料与方法 这一问题的根本途径是抗病虫新品种的选育。随着 现代生物技术的发展，采用转基因技术向植物定向 1．1植物材料 转移有价值的目的基因成为可能，目前在重要农作 巴戟天(MorindaofficinalisHow)来源于国家 物及经济作物方