GMP培鸭暗资料轧盖密封完好性试验.ppt

轧盖密封完好性试验 目 录 一、概 述 二、试验准备 三、试验步骤 四、再验证周期 一、概述 1、试验目的：用微生物侵入试验对冻干粉针剂车间轧盖密封系统进行挑战性试验，以确认轧盖后容器密封系统的完好性。 2、试验概述：取西林瓶灌装入已灭菌培养基，在正常生产线上抽真空、压塞、轧盖。此后，将容器密封面浸入高浓度运动性菌液中，取出并检查是否有微生物侵入，以确认容器密封系统的完好性。同时，须做阳性对照试验，确认培养基的促菌生长能力。 二、试验准备 批量：1000瓶/批 1、洗瓶: 清洗西林瓶1100只，经305℃干热灭菌12分钟后送至灌装间备用。 2、胶塞处理: 清洗胶塞1100只，经121 ℃湿热灭菌20分钟后备用。 3.1 预先对配制、灌装系统按照冻干粉针剂无菌操 作要求进行清洁、灭菌。3.2 按照培养基生产厂商要求，每批按 TSB（胰 酪胨大豆肉汤培养基）32.3g，加1L注射用水 的比例进行配制，加热溶解并标定至4.5L，置 于灭菌柜中用纯蒸 汽121℃灭菌20min。  4、制备微生物菌悬液：4.1从铜绿假单胞菌（ATCC 9027）的新鲜斜面上取一整环培养物，分别接入含6ml无菌培养基的试管中，在30～35℃下培养18～24h。4.2将每管的培养物分别转入含600ml相同培养基的容器内，于30~35℃下培养18～24h。在培养结束时，能明显见容器内培养基出现浑浊。4.3在微生物侵入试验开始时，所用菌悬液浓度（活菌数）必须达到1×106CFU/ml。 试验步骤 营养试验 微生物侵入试验 阳性对照实验 微生物侵入试验后 营养试验 三、试验步骤 1.1从1000瓶培养基中取150瓶作为本次试验的试样品。 1.2用剪刀轻轻从斜侧面去除至少50瓶试样品的整个铝盖（注意不要破坏其密封口，将去铝盖时不慎损坏容器密封性的所有试样品剔除），另取80瓶带盖试样品，将每一试样品倒转，使培养基与西林瓶内表面及胶塞充分接触，在30～35℃竖立倒置培养14天。 三、试验步骤 1.3在培养期内，当试验中发现任何带盖试样品长菌时，则试验无效，须弃去全部试样品，重新从头开始试验。 2.1所有试样品培养14天均不长菌时，从上述1.2 试样品中随机取20个带盖试样品，每个试样 品内接种100CFU铜绿假单胞菌。在30～35℃ 下培养7天，或培养至所有试样品都呈阳性结 果。 四、再验证周期 1、当轧盖设备发生变化时应进行再验证; * * 概 述 试验准备 试验准备 洗 瓶 胶塞处理 培养基 菌悬液 二、试验准备 3、配制培养基: 二、试验准备 3.3将灭菌后的培养基（TSB配制液）通过 未装滤膜及滤芯的过滤系统，在灌装机 的数控器上调节好装量（3.5ml）进行灌 装半加塞。 3.4将灌装半加塞的培养基在百级层流保护下转移至冻干机内抽真空，结束后全压塞、出箱、轧盖。 二、试验准备 1、试验样品的制备: 三、试验步骤 2、确认培养基促菌生长能力―营养试验： 2.1.1若7天内，所有接种铜绿假单胞菌的试样品中，微生物生长良好，则容器内培养基的促菌生长能力可判为合格。使用革兰染色后，并置于紫外灯下，培养基呈蓝绿色荧光，则确认试样品容器内生长的菌为接入的铜绿假单胞菌，即为阳性。 2.1.2若7天内，所有接种铜绿假单胞菌的试样品中，微生物生长条件不好或经鉴别后受其它菌种污染，则试验失败，需重新作营养试验。 三、试验步骤 3、微生物侵入试验操作步骤: 微生物培养及侵入试验应在不影响生产环境的地方（中心化验室阳性室）进行。 三、试验步骤 3.1 将新鲜的铜绿假单胞菌（ATCC 9027）的 菌悬液倒入适当的容器内，用试管架固定 试样品。 三、试验步骤 3.2 从上述1.2试样品中再取50只带盖试样品为 A组，另取25个去盖 试样品为B组，均倒 置于菌悬液中,使试样容器内的培养基充 分接触封口内表面，试样品的颈部及封口 的外表面应完全浸泡在菌悬液中（如下图 1所示）。 图1　微生物挑战试验示意图 三、试验步骤 3.3将A组和B组试样品在菌悬液中持续浸泡约4h后，取出试样品，擦干试样品容器外残余的菌悬液，其外表用含0.5%过乙酸的70%异丙醇消毒五分钟（注意不要破坏其密封口）。 三、试验步骤 3.4从1.2试样品中另取有盖和去盖的培养基各两 个，做阳性对照。阳性对照试样品不经菌悬