(学生版)肿节风的提取、制片和片剂质量控制综合性实验讲义.docxVIP

PAGE \* MERGEFORMAT2 PAGE \* MERGEFORMAT8 肿节风的提取、制片及片剂质量控制综合性实验讲义 范一文 目录  TOC \o 1-3 \h \z \u  HYPERLINK \l _Toc415080827 实验一肿节风总黄酮的醇沉提取实验  PAGEREF _Toc415080827 \h 3  HYPERLINK \l _Toc415080828 实验二肿节风分散片的制备及片剂的质量控制  PAGEREF _Toc415080828 \h 5  实验一肿节风总黄酮的醇沉提取实验 一、实验目的： 1、了解中药提取的基本方法。 2、掌握肿节风有效成分的水提醇沉提取纯化技术。 二、实验原理： 水提取乙醇沉淀法（简称醇沉法）是中药活性成份纯化与中药制剂精制过程中常用的方法。水提醇沉是利用中药中的大多数有效成分,如生物碱盐、甙类、有机酸盐、氨基酸、多糖等易溶于水和醇的特性,先用水煮粗提有效成份,再将水提取液浓缩,加入适量的乙醇反复数次沉降,去除杂质,从而得到纯化的有效成分提取液。影响醇沉效果的因素很多，水提液浓缩温度、相对浓度、醇沉液含醇量、乙醇添加方法、醇沉次数、醇沉温度与时间等都会对醇沉物的品质产生影响。本实验以肿节风为提取原材料，利用优化的醇沉条件，提取纯化肿节风中的总黄酮。 本实验中，总黄酮的含量测定采用的是紫外分光光度法。总黄酮溶液在紫外光谱的范围内有明显的吸收峰，而且其溶液的浓度在一定的范围内与其吸光度呈线性关系。通过测定不同浓度的芦丁（黄酮标准品）对照品溶液的吸光度，建立标准曲线。测定样品溶液的吸光度，则可从标准曲线上确定溶液中总黄酮的含量。 三、实验材料与仪器 1.实验材料：肿节风药材、芦丁标准品、无水乙醇、硝酸铝、氢氧化钠、亚硝酸钠、蒸馏水 2.主要器材：紫外分光光度计、旋转蒸发仪、电子天平、离心机、电炉、25ml容量瓶、0.45μm的微孔滤膜 四、实验方法 （一）实验基本流程 水煮肿节风药材，浓缩得到浸膏（为制片提供原材料） 醇沉 通过芦丁标准曲线测定肿节风总黄酮的含量。 实验操作 水煮 用电子天平称取100g的肿节风药材于烧杯中，加800ml水在电炉上煮2h左右，过滤保留药液，药材残渣再加800ml水煮2h左右，过滤合并药液并将药液在电炉上蒸发至50ml左右。将药液移至旋转蒸发仪中蒸发至液体相对密度为1.3左右，即得肿节风浸膏（差不多20ml）。 醇沉 取1ml肿节风浸膏于烧杯中（用注射器），加水使其初膏浓度为1：2（即每毫升浸膏相当于2g干药材），然后加入浸膏液体总体积1.5倍量的无水乙醇，使浸膏溶液中乙醇浓度达60%（说明：100g药材旋蒸出20ml浸膏，初膏浓度即为1:5，1ml初膏浓度为1：5的浸膏相当于5g干药材，加1.5ml水使液体量达2.5ml，则此时其初膏浓度变为1：2，再加2.5×1.5=3.75ml无水乙醇使乙醇浓度达60%）。然后置冰箱中冷藏15h，得到醇沉后溶液。醇沉过程需做3个平行样。 3.标准品溶液的制备 精密称取芦丁标准品10.0mg，在小烧杯中加体积分数为60%的乙醇溶解后转移至50mL量瓶中，定容至刻度。 4.建立标准曲线 分别精密吸取芦丁标准品溶液0、2、3、4、5、6、7mL，置25mL量瓶中，分别加体积分数为60%的乙醇补足至7mL，然后加入质量分数为5%亚硝酸钠1.0mL，摇匀，静置6min，加入质量分数为10%硝酸铝1.0mL，摇匀，静置6min，再加入质量分数为4%的氢氧化钠10.0mL，用蒸馏水定容至25mL，摇匀，静置10min后，然后按2.2.3中方法处理，用可见-紫外分光光度计于510nm处测吸光度。以芦丁标准品的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 5.样品溶液的制备 取醇沉后溶液，离心（4000r/min,5min）,再取离心上清液置蒸发皿中，在烘箱中烘1h左右烘干，先加入1ml蒸馏水溶解，再加入8ml无水乙醇，搅拌均匀，然后离心取上清液，用0.45μm的微孔滤膜滤过，加水定容至25mL，作为样品溶液。 6.样品含量测定 精密吸取样品溶液1.0ml，按4项中所示方法加试剂，于510nm处测定吸光度；另取一空的25ml容量瓶，按相同操作加试剂，作为空白对照，测定吸光度。将三个平行样取平均值计算含量。 实验结果 获取制备肿节风片的原材料-浸膏。 测得肿节风中总黄酮的含量。 六、注意事项 1.水煮药材时，要随时观察，切记烧干了。 2.醇沉时加入乙醇请尽量缓慢添加，并用玻璃棒搅拌均匀。 3.在实验过程中发现,样品随放置时间延长,吸光度测定值逐渐减小,而且结果相差较大。因此,在试验的过程中应严格控制各个步骤的操作时间及最终测定含量时间不能相差太大,保