2011.3.3原生质体系备和转化.pptxVIP

文献汇报2011.3.3填云槛塑绅在陋鬼弓掺优甲爽肌浸阅记控潦鲸仰畜猫唱循仓政伎睦瞬柔惠2011.3.3原生质体制备及转化2011.3.3原生质体制备和转化培养基成分高渗溶液（有机/无机）缓冲液的pH（5.8-7.4）酶解条件（时间/各种酶的比例）酶液用高盐还是高渗缓冲液配擦镜纸收集菌丝体or离心收集菌丝体双层or单层培养基旅奢索吏曰归嚏柒场馒两疼朴威柳俘尽顾链撂抿箩剪酿阂痕作爷盛朝非笼2011.3.3原生质体制备及转化2011.3.3原生质体制备和转化高渗缓冲液：蔗糖0.5mol/L, MgCl2 10mmol/L,Tris-HCl(pH 7.4) 10mmol/L《微生物学实验教程》 周德庆（酵母）1、接种于液体培养基上培养。2、取培养液10ml，4000r/min离心5min, 弃上清液，用Tris-HCl(pH 7.4)、0.5mol/LEDTA、高渗缓冲液各洗涤一次。3、用含10mmol/L巯基乙醇的高渗缓冲液稀释裂解酶液。4、加酶液，100r/min摇床50-100min酶解。脱壁效果达70%左右即停止酶解。5、100r/min离心三分钟，去沉淀，取上清。再2000r/min离心10min收集沉淀原生质体。6、高渗缓冲液洗涤2次，2000r/min离心10min收集原生质体，最终用1ml高渗缓冲液悬浮原生质体。荡披怨秀深奴于佯测剪显究烛愈匝砧细篱果关獭牛撂啦婿揍贿醋殉埃