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《3.1 酶的制备及活力测定》教案 教学目标与原理： 掌握过氧化氢酶活力的测定原理和比色测定方法，并用此方法测定水产动物血清中过氧化氢酶的活力。 血清中的CAT）分解H2O2的反应，可通过加入钼酸铵而迅速中止，剩余的H2O2与钼酸铵产生一种淡黄色的络合物，在405nm处测定其生成量，即可计算出CAT的活力，CAT单位定义为：每1分解1μmol的过氧化氢即为1个酶活力单位。 [试剂磷酸盐缓冲液（67mmoll，pH=7.4）：1L蒸馏水中，调pH至7.4。 2、基质液（65μmoll,H2O2）：%H2O23.69ml加pH7.4磷酸盐缓冲液至500ml。 3、钼酸铵：(NH4)6Mo7O24］20.2g溶于500ml蒸馏水中。 器材721分光光度计,0.5cm恒温水箱（37℃±0.5℃）试管16mm×100mm实验步骤样品测定：于37水浴5min 基质液 1.0ml 1.0ml 1.0ml 钼酸铵1.0ml 1.0ml — 缓冲液0.2ml — 血清 0.2ml — 0.2ml 37℃水浴60s后钼酸铵1.0ml10min后于405nm以水调零比色。记录吸光度值（A） 2、计算： 过氧化氢酶活力(U/L)=(A对－A测)/A标]×（65×1×1000/0.2×1000） =[(A对－A测)/A标]×325 (式中65为标准管H2O2浓度，1为1.0mlH2O2体积，100