微生物分布及消毒灭菌.ppt

实验三 微生物的分布与消毒灭菌 实验目的 1 了解培养基的种类与细菌的生长现象。 2 掌握空气及咽喉部的微生物检查方法。 3 掌握皮肤上的微生物检查与皮肤消毒试验。 4 掌握紫外线杀菌试验的原理及方法。 5 掌握细菌药敏试验的原理意义及结果判定。 实验内容 1.培养基的种类与细菌的生长现象 2.细菌分布（空气及咽喉部的微生物检查,操作，每组一份） 3.皮肤上的微生物检查与皮肤消毒试验 4.紫外线杀菌试验（操作，每组一份） 5.细菌药敏试验（操作，每组一份） 实验用品 固体、半固体、液体培养基及培养物，菌种，接种环，酒精灯，蜡笔，37℃培养箱，75﹪酒精棉球，紫外线灯，黑纸片，药敏纸片，镊子等。 培养基的种类及细菌的生长现象 培养基按物理性状分为 半固体培养基：观察细菌动力 细菌的分布 1.原理：细菌无处不在，在空气、自来水、土壤、手指、桌面、货币、手机、毛巾等都有细菌的存在；有普遍或特殊、相同或不同的生长条件 2.方法：(1)空气（把无菌固体培养基打开在空气中暴露15min，盖好标记，底部朝上放入37℃培养箱培养24h） (2)咽喉（把无菌固体培养基打开，对准，用力咯三下，盖好标记，底部朝上放入37℃培养箱培养24h） 皮肤上的微生物检查与皮肤消毒试验 2 方法：(1)把无菌固体培养基底面外用蜡笔划成10格并记号 (2)5个同学每人两格，单号格用未消毒的右手食指在培养基上按手印，双号格，用75﹪酒精棉球消毒的手指按手印 (3)盖好标记，底部朝上放入37℃培养箱培养24h。 紫外线杀菌实验 原理 紫外线中波长为200-300nm者具有杀菌能力，其中265-266nm的杀菌作用最强。其杀菌作用主要是因为DNA吸收了紫外线引起胸腺嘧啶形成二聚体，从而干扰了DNA的复制，轻则发生突变，重则导致死亡。紫外线杀菌力强而稳定，但穿透力弱，不能通过玻璃和纸张，因此，只适用于直接照射的物体表面消毒或空气消毒。 紫外线杀菌实验 方法： 1.涂板（先用无菌接种环取葡萄球菌菌种少许在无菌固体培养基上划线接种） 2.将涂有细菌的平板用黑纸片遮住平板中央，放 置在距紫外线60-100cm处，直接接受紫外线照射30min； 3.照射完毕，取出黑纸片，盖好琼脂平板，放37℃温箱孵育24h，观察结果。 药敏试验 K-B（纸片扩散）法 原理 K-B(纸片扩散）法 方法 K-B法 结果 实验注意事项： 1 观察液体培养基中细菌的生长现象时不要摇动试管 2 培养基放入温箱时要底部朝上 3 皮肤上微生物检查时食指要轻按，不要压烂培养基 4 紫外线杀菌试验时划线接种不要划烂培养基，照射时间要充分 5 药敏试验要把药敏纸片贴牢固 * * * * 固体培养基(2-3%) 半固体培养基 (0.2-0.5%) 液体培养基 鉴别培养基 培养基按用途可分为 基础培养基 营养培养基 选择培养基 厌氧培养基 金黄色葡萄球菌菌落 （S型菌落） 结核分枝杆菌菌落 （R型菌落） 肺炎链球菌 （M型菌落） 细菌在固体培养基上形成的菌落 菌苔 液体培养基：可观察到细菌不同的生长现象 1 原理：消毒剂对细菌有毒性作用，使菌体蛋白质变性或凝固等。主要用于人体表面和医疗器械、周围环境的消毒。 药敏试验的目的： 检出细菌对药物的敏感性，以确定病原细菌对哪种药物敏感 药物敏感实验的临床意义 指导临床用药、及时控制感染 抑菌圈 药物可干扰细菌的代谢，阻碍和影响细菌细胞壁的合成、膜的通透性及核酸和蛋白质的合成，不同的细菌种类或菌株，对同一药物的敏感性不同，通过将药敏纸片放于已接种细菌的培养基上，测量其抑制细菌生长所产生的抑菌圈的大小来判定病原菌对抗菌类药物的敏感性 无菌接种环取菌 固体培养基上划线接种 放置含药纸片 37℃温箱孵育24h 24mm 15mm 抑菌圈直径 用毫米尺量取 抑菌圈直径, 根据参照表判断结果 24mm 15mm K-B法 * * 含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的浓度梯度。在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC)成负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。 结果敏感：被测菌株所引起的感染可以用常用剂量的该抗菌 药物治愈 耐药：被测菌株不能被常用剂量所达到的组织内或血 液中的抗生素所抑制（临床治疗无效）中介：只是抑菌圈直径介于敏感和耐药之间的缓冲域 * *