叶绿素荧光诱导动力学分析及其在植物生理生态研究中的应用.docVIP

叶绿素荧光诱导动力学分析及其在植物生理生态研究中的应用 王婧如 [摘要]叶绿素荧光动力学诱导技术具有检测快速、灵敏和对样品的无损伤性等优点，在植物抗性生理学及生态学中得到广泛的应用。本文就叶绿素荧光动力学分析原理及相关参数作了介绍，简要概括了它在植物抗性生理生态中的应用。 植物绿色组织经暗适应后，在可见光照射下会发出随时间不断变化的微弱的暗红色荧光信号，这一现象由KautskyHirsch教授于1931年首次观察到，称之为叶绿素a荧光诱导动力学，或者，Kautsky效应。在自然条件下，叶绿素荧光与光合作用有着十分亲密的关系，一方面，当植物暴露于过强的光照下时，通过荧光作用将强光灼伤损失降至最小，起到保护光合组织的作用；另一方面，正常条件下叶绿素荧光和光合速率呈负相关，即光合速率高时，荧光较弱，反之亦然。根据这一点，利用叶绿素荧光诱导技术可快速测得植物光合作用的变化，又由于其测量时对植物叶片光合组织的无损伤性，该技术现已广泛地应用于植物生理生态学的研究。 叶绿素荧光诱导动力学的过程及相关原理参数 1.1叶绿素荧光动力学的过程 在室温下，绿色植物发出的这种荧光信号，绝大部分是来自于叶绿体光系统II（PSII）的天线色素蛋白复合体中的叶绿素a分子[1]。经暗适应的绿色植物样品突然受到可见光照射后，其体内叶绿素a分子可在纳秒级时间内发出一定强度的荧光，此瞬间的荧光诱导相位称为初相或“O”相，此时的荧光称为固定荧光（Fo）。随后荧光强度增加的速度减慢，在Fo处形成拐点，接着以毫秒级速度形成一个缓台阶，称为“I”相和“D”相，数秒后荧光强度可达最高点，称为“P”峰。在P峰之后，通常经1~2次阻尼震荡，才降到接近Fo的稳定“T”相终水平。荧光强度下降的过程称为荧光淬灭[2-4]。 以荧光信号强度随时间变化作出的曲线称为叶绿素荧光诱导动力学曲线（图1）。一般情况下，快速叶绿素荧光诱导动力学曲线指的是从初相（O相）至最高峰（P峰）的荧光变化过程（图2），主要与PSII的原初光化学反应有关，而下降的阶段主要与碳代谢有关。具体相关参数及其生理意义如下： 图1 叶绿素荧光诱导（引自GovindjeePapageorgiou1971） 图2 典型的快速叶绿素荧光诱导动力学曲线 （引自Krause 1991） Fig.1 Kinetic curve of chloroplly fluorescence after induction Fig.2 A typical chlorophyll a fluorescence transient Fo：固定荧光或初始荧光产量，也称基础荧光，0水平荧光。是植物经暗适应后，PSII的电子受体QA、QB及PQ库等均完全失去电子而被氧化，处于“完全开放”状态时的荧光产量，代表不参与PSII光化学反应的光能辐射部分。通常暗适应15分钟后测得。 Fv：可变荧光产量。是植物接受光照后，PSII被激发产生的电子经过去镁叶绿素（Pheo）传给QA将其还原，生成QA－，由于QB不能及时接受电子将 QA－ 氧化（P680* →Pheo-需要3ps，Pheo-→QA需要250-300ps，而QA－→QB需要 100-200μs（Krause 和 Weis 1991）），引起QA－大量积累，荧光迅速上升，表现在图上就是“I”相和“D”相。此处的缓台阶显示出PQ库的异质性，即电子传递过程中快还原型 PQ库先被完全还原（I-D），随后才是慢还原型 PQ 库被还原（D-P）。但是，有学者对此观点存有质疑，目前还需要进一步的研究。Fv反映了PSII原初电子受体QA 的还原情况。 Fm：暗适应下最大荧光产量。是PSII的电子受体QA、QB及Pheo完全处于还原状态，反应中心完全关闭，不再接受光量子时的荧光产量，在图上表示为“P”峰的出现。反映了通过PSII的电子传递情况。通常叶片经暗适应20 min后测得。Fm=Fo+Fv。 Fv / Fm：暗适应下的最大光化学量子产额，反映PSII反应中心内禀光能转换效率，叶暗适应20 min后测得。在正常条件下该参数变化极小，不受物种和生长条件的影响，逆境下该参数明显下降。 Fv / Fo：表示PSII的潜在活性。无胁迫环境正常情况下，该参数值为0.82，在老化的叶片中这一比值较小，接近于0。 Fm / Fo：反映通过PSII的电子传递情况。 F：任意时间实际荧光产量。 Ft：稳态荧光产量，有时用Fa、Fs表示。 △Fv：可变荧光衰减能力，表示植物可变荧光衰减能力的大小。△Fv = Fm - Ft Rfd：可变荧光下降比值，反映植物叶片的光合作用潜力。Rfd = △Fv / Ft △Fv / Fo ：可变荧光淬灭速率。 Fo’：光适应下最小荧光，在光适应状态下全部PSII反应中心都开放时的荧光强