高选择性不对称还原NN-二甲基-酮-噻吩-丙胺的重组氧化.PDF

微生物学通报 Jan. 20, 2017, 44(1): 1−8 Microbiology China /wswxtbcn tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.160201 研究报告 高选择性不对称还原N,N-二甲基-3-酮-3-(2-噻吩)-1-丙胺的 重组氧化还原酶催化性质及其酶促转化 1 1* 1,2 李斌 聂尧 徐岩 (1. 214122) (2. 214122) 摘 要：【目的】通过表达多种重组立体选择性氧化还原酶，分析其催化不对称还原N,N-二甲 基-3-酮-3-(2-噻吩)-1- 丙胺(DKTP)的性质，从而构建酶促合成(S)-N,N-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-1- 丙胺(DHTP)的反应体系。【方法】基于已有立体选择性氧化还原酶重组大肠杆菌，通过Ni 离子 亲和层析法纯化得到重组氧化还原酶，以DKTP 为底物，考察不同重组氧化还原酶对DKTP 的 催化活性和选择性，进一步对高选择性酶促合成(S)-DHTP 的重组酶CR2 进行性质分析，并考察 其在最适条件下不对称还原 DKTP 的过程。【结果】筛选获得产物构型为(S)-型的催化活性最高 的酶为CR2 ，该酶米氏常数Km 为0.135 mmol/L ，kcat/Km 为3.689 L/(mmol·s) ，最适pH 8.4 (0.1 mol/L 三乙醇胺缓冲液) ，最适反应温度为35 °C ，在10−45 °C 条件下和pH 7.5−8.5 较为稳定，Zn2+ 离 子对酶活有促进作用。CR2 催化DKTP 不对称还原反应6 h 后，DHTP 的产率达92.1%、光学纯 度达99.9%。【结论】基于活性和选择性分析，获得不对称还原DKTP 的目标酶CR2 ，其催化特 性有利于高立体选择性还原 DKTP 生成度洛西汀中间体(S)-DHTP ，从而为进一步提高酶促不对 称还原DKTP 的转化效率提供研究基础。 关键词：氧化还原酶，生物催化，不对称还原，(S)-N,N-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-1- 丙胺，酶学 特性 Foundation item: National Natural Science Foundation of China (No. ; Natural Science Foundation of Jiangsu Province (No. B; 111 Project (No. 111-2-06); Program for Advanced Talents within Six Industries of Jiangsu Province (No. 2015-NY-007); Priority Academic Program Development of Jiangsu Higher Education Institutions *Corresponding author: Tel: 86-510 E-mail: ynie@ Received: March 09, 2016; Accepted: April 29, 2016; Published online (): June 07, 2016 基金项目：(No. 2137610721336009) (No. B (111 No.