不同培养条件对坛紫菜叶状体体细胞发育分化影响的研究.pdfVIP

第27卷第2期 台 湾 海 峡 Vd．27，No．2 OFOCEANOGRAPHYINTAIWANSTRAIT 2008年5月 JOURNAL May，2008 不同培养条件对坛紫菜叶状体体细胞发育 分化影响的研究 赵 扬，蔡嘉力，左正宏，吕良炬，陈奕欣 (厦门大学生命科学学院，福建厦门361005) haitanensis)叶状体为材料，通过海螺酶酶解获得叶状体单离体细 摘要：本文以野生坛紫菜(Porphyra 胞，探讨了细胞密度、光照强度对坛紫菜叶状体体细胞发育分化的影响．研究结果表明：细胞密度对 坛紫菜叶状体单离体细胞的分裂、出苗具有明显的影响．其中，细胞培养3—5d时，分裂率随着细胞 时，随着细胞密度的增大，体细胞出苗率相应减小．光照强度对坛紫菜叶状体单离体细胞的分裂、出 苗也具有显著影响．细胞培养5d时，分裂率随着光照强度的增大而增大；5—7d时，体细胞分裂速 度随着光照强度增大而增大；9—19d培养期内，出苗率随着光照强度的增大而增大．本实验结果为 坛紫菜转基因育种等研究提供了可资借鉴的基础资料． 关键词：坛紫菜；细胞密度；光照强度；发育分化 中图分类号：Qs}38 文献标识码：A 紫菜是一种经济价值很高的海藻．我国为世界第三大紫菜养殖国．但目前我国紫菜养殖业面临品种退 化、病害频发的局面¨．2J．因此，开展紫菜基因工程研究，进而培育紫菜新品种是解决上述问题的重要途径之 一．紫菜叶状体原生质体与单离体细胞为单倍体，其表现型与基因型相同，目前已成为紫菜基因工程育种最 常用的转基因受体HJ．因而，紫菜叶状体体细胞发育分化研究已成为紫菜转基因育种研究的基础及热点．紫 菜叶状体单离体细胞的发育分化首先受其所处发育分化阶段的影响，另一方面也受外界培养条件的显著影 响．细胞密度、光照强度、盐度等是紫菜单离体细胞培养的重要参数，迄今，已见报道的研究多集中于上述培 养条件对紫菜壳孢子附着、叶状体生长、单孢子形成放散等的影响H胡J．而关于上述培养条件对紫菜叶状体 单离体细胞发育分化影响的研究报道极少【l¨12J，并存在不相一致之处． 坛紫菜(Porphyra 照强度对坛紫菜叶状体体细胞发育分化多个方面(成活率、分裂速度、出苗率等)的影响，从而进一步完善坛 紫菜叶状体体细胞发育分化的研究，并为坛紫菜转基因育种等研究提供可资借鉴的基础资料． 1材料与方法 1．1 材料 坛紫菜(野生)，采于福建省平潭县海区，Et龄约40d，阴干后-200C保存备用． 1．2实验项目 1．2．1 细胞密度对坛紫菜叶状体体细胞发育分化的影响坛紫菜叶状体单离体细胞的制备、培养方法参照 cornatcz 王素娟(1994)的方法u31．所用海藻解壁酶由朝鲜花冠小月螺(LunellacoreerLsis)提取制备，具体参照 朱仁华的方法H41．(1)体细胞培养密度的设置及培养．体细胞培养采用6孔板进行，培养密度梯度为： l×103,5×103、l×104,5×104、1×105似孔．培养第3天起开始换液，每2d 1次．(2)体细胞发育分化的观 测记录．体细胞分离培养后1d，开始观测记录，以后每次换液前观测记录．体细胞成活率(％)=(成活细胞 收稿日期：200r7．034)6 基金项目：福建省自然科学资助基金项目(B0510004) 作者简介：赵扬(1971一)，男，讲师，博士． 通讯作者：陈奕欣(1949一)，女，教授；E-mail：chenyix@mu．edu．cn 2期 赵扬等：不同培养条件对坛紫菜叶状体体细胞发育分化影响的研究 ·175· 数／初始成活细胞数)×100；初始成活细胞数为培养第一天5个10×10视野内的成活细胞数