乙型肝炎病毒活性RNase H酶的表达纯化及在药物筛选中的应用.pdfVIP

470 ．论著 乙型肝炎病毒活性RNaseH酶的表达纯化 及在药物筛选中的应用 卢高峰，于泳，孙趁意，崔静，郑鹏远 【摘要】 目的 获得具有体外活性并且能够用于药物筛选的乙型肝炎病毒(HBV)RNaseH酶。 RNase 方法 以pMAL—c5xHis为骨架，构建重组基因C型HBVH酶表达质粒，通过大肠埃希菌高效 RNase H酶。Commassie 表达出分子量为60KDa的可溶性目的蛋白，通过镍亲和层析法纯化出HBV RNase 染色和WesternBlot方法鉴定目的蛋白；采用寡核苷酸引导的RNA切割法鉴定HBVH酶活 RNase 性、对温度变化的稳定性及其在HBV H酶抑制剂体外筛选中的应用。结果Commassie染色、 Western Blot分析结合寡核苷酸引导的RNA切割法鉴定显示成功表达和纯化出具有活性的HBV RNase RNase H酶，酶活性对温度变化具有稳定性，并且对HBV H酶抑制剂具有良好的敏感性。 RNase 结论通过基因重组和镍亲和层析法可以体外获得具有活性的HBV H酶，并可以用于HBV RNase H酶抑制剂的体外筛选。 【主题词】 肝炎病毒，乙型；RNaseH；活性；药物 and ofactiveHBVRNaseHandits in Lu purification applicationdrugscreening Expression Second Chenyi，Cui ofGastroenterology，the Gaofeng，YuYong，Sun ring，ZhengPengyuan．‘Department 450014，China． AffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity，Zhengzhou 123@126．corn Correspondingauthor：ZhengPengyuan，Email：medp7 To and activeHBVRNaseHinvitrocandidatefor 【Abstract】Objectiveexpresspurify drug cDN for HBV Hwas A C RNase cloned screening．Methods bygene Codon—optimizedsequencesgenotype into withaN—terminalMBPandC—terminalhexahistidineRNaseH pMAL—c5xHis tag tag．HBV synthesis was in E．coliBL21 H wereenriched cells．RNase expressed