动物胚胎工程yyd哺乳动物胚胎分割技术浅论.pdfVIP

第三篇 胚胎移植 分割与嵌合技术 第六章 哺乳动物胚胎分割技术 一、胚胎分割 一、胚胎分割 胚胎分割（embryo splitting ）是将一枚胚胎用 显微手术的方法分割成二分、四分甚至八分 胚，经体内或体外培养，然后移植入受体中， 以得到同卵双生或同卵多生后代的技术，也是 胚胎克隆的一种方法。 二、胚胎分割发展简介 二、胚胎分割发展简介 1901 Spemann首次将蛙第一次卵裂后的两个卵裂球分离开， 1901 Spemann首次将蛙第一次卵裂后的两个卵裂球分离开， 人工地产生了双胞胎。 人工地产生了双胞胎。 1970 Mullen等将小鼠2--细胞胚胎的两个卵裂球分开，经过 1970 Mullen等将小鼠2--细胞胚胎的两个卵裂球分开，经过 培养后再移植给受体，产生了哺乳动物的首次人工双胞胎。 培养后再移植给受体，产生了哺乳动物的首次人工双胞胎。 1978 Moustafa等将小鼠桑椹胚一分为二，得到双胞胎。 1978 Moustafa等将小鼠桑椹胚一分为二，得到双胞胎。 1979Willadsen和Meineck—Tillmann等分别将绵羊2细胞胚 1979Willadsen和Meineck—Tillmann等分别将绵羊2细胞胚 和桑椹胚一分为二或一分为四，获得同卵双胞胎或四胞胎。 和桑椹胚一分为二或一分为四，获得同卵双胞胎或四胞胎。 二分胚成功：小鼠、兔、绵羊、山羊、牛、马和人 二分胚成功：小鼠、兔、绵羊、山羊、牛、马和人 四分胚成功：兔、绵羊、猪、牛、马 四分胚成功：兔、绵羊、猪、牛、马 八分胚：兔、绵羊、猪 八分胚：兔、绵羊、猪 三、胚胎分割的基本程序 三、胚胎分割的基本程序 1、分割器具的准备 1、分割器具的准备 2、胚胎预处理 2、胚胎预处理 3、胚胎分割 3、胚胎分割 4、分割胚的培养 4、分割胚的培养 5、分割胚的保存和移植 5、分割胚的保存和移植 四、胚胎分割的方法 四、胚胎分割的方法 （1）显微针分割法 该法适用于卵裂球阶段的胚胎。操作时在显微操作仪下将 胚胎固定，用玻璃针在透明带上作一切口，将卵裂球从透明带中 移出，并吹吸卵裂球使之离散，将其装入2个预先准备好的空透 明带内，进行移植。该方法具有较高的同卵双生率，但操作程序 复杂。 （2）显微刀分割法 该法适用于对桑葚胚和早期囊胚进行分割。在显微操作仪 下固定胚胎，用特制显微刀片将胚胎均匀一分为二，分别装入空 透明带中，进行移植。 四、胚胎分割的方法 四、胚胎分割的方法 （3）酶软化透明带后显微分割法 （3）酶软化透明带后显微分割法 用0.5%的链霉蛋白酶软化胚胎透明带, 若是紧密化胚 用0.5%的链霉蛋白酶软化胚胎透明带, 若是紧密化胚 胎 (如桑椹胚) , 则需在无钙、镁的平衡盐溶液中处理20 分 胎 (如桑椹胚) , 则需在无钙、镁的平衡盐溶液中处理20 分 钟, 使胚胎去紧密化，将胚胎固定，把将针置于欲分割的胚 钟, 使胚胎去紧密化，将胚胎固定，把将针置于欲分割的胚 胎上面, 使其与胚胎呈30 度角, 对准胚胎的正中平分线徐 胎上面, 使其与胚胎呈30 度角, 对准胚胎的正中平分线徐 徐下压，即可将一个胚胎分割成两半。 徐下压，即可将一个胚胎分割成两半。 （4 ）酶消化去透明带后分割法 （4 ）酶消化去透明带后分割法 用0.25%～0.5%的链霉蛋白酶去掉胚胎透明带, 然后 用0.25%～0.5%的链霉蛋白酶去掉胚胎透明带, 然后 用显微玻璃针或微手术刀将裸胚一分为二。 用显微玻璃针或微手术刀将裸胚一分为二。 四、胚胎分割的方法 四、胚胎分割的方法 （5 ）徒手分割法 （5 ）徒手分割法 徒手分割法主要适用于分割体积较大的胚胎，其优 徒手分割法主要适用于分割体积较大的胚胎，其优 势在于可以不用显微操作仪。在立体显微镜下，用止血钳夹 势在于可以不用显微操作仪。在立体显微镜下，用止血钳夹 住切割刀片，将透明