阿特拉津和毒死蜱单一及联合暴露对鲤鱼热休克蛋白影响（Effects of single and combined exposure of atrazine and chlorpyrifos on heat shock protein in carp）.pdfVIP

  目 录 摘要 I 英文摘要III 1 引言1 1.1 阿特拉津和毒死蜱的结构及理化性质1 1.2 阿特拉津和毒死蜱的作用机理及在环境中的分布代谢2 1.2.1 阿特拉津毒和死蜱的作用机理2 1.2.2 阿特拉津和毒死蜱的应用现状以及在环境中的分布2 1.2.3 阿特拉津和毒死蜱在环境中的代谢和分解2 1.3 阿特拉津和毒死蜱的毒理学研究进展3 1.4 热休克蛋白的毒理学研究进展4 1.5 试验的目的与意义 5 2 材料与方法6 2.1 试验毒物 6 2.2 试验鱼的驯养及暴露环境6 2.3 试验的总体设计 6 2.3.1 暴露试验 6 2.3.2 恢复试验 6 2.4 样品的采集与处理 6 2.5 主要仪器和试剂 7 2.5.1 主要仪器 7 2.5.2 主要试剂 8 2.6 检测项目与方法 8 2.6.1 组织中 HSP60 、HSP70 和 HSP90 mRNA 表达的检测 8 2.6.2 鲤鱼 HSP60 、HSP70 和 HSP90 基因的克隆、原核表达、多克隆抗体的制备 10 2.6.3 鲤鱼 HSP60 、HSP70 和 HSP90 蛋白表达的检测12 2.7 试验数据的分析与统计 12 3 结果与分析13 3.1 鲤鱼 HSP60 、HSP70 和 HSP90 多克隆抗体的制备13 3.1.1 肝脏组织中总 RNA 的提取与鉴定13 3.1.2 鲤鱼 HSP60 、HSP70 和 HSP90 基因的 PCR 扩增结果 13 3.1.3 鲤鱼 HSP60 、HSP70 和 HSP90 mRNA 基因序列的测序结果14 3.1.4 重组表达载体的构建与鉴定14 3.1.5 融合蛋白的表达、鉴定与纯化15 3.1.6 多克隆抗体的制备和鉴定结果的17 3.2 亚慢性试验临床中毒症状观察17 3.3. 实时 PCR 检测方法的建立18 3.3.1 鲤鱼热休克蛋白基因标准曲线的线性回归分析18 3.3.2 鲤鱼 HSP60 、HSP70 和 HSP90 基因荧光定量 PCR 扩增结果 18   i   3.4 阿特拉津和毒死蜱单独及联合暴露对鲤鱼热休克蛋白表达影响的检测结果18 3.4.1 阿特拉津和毒死蜱单独及联合暴露对鲤鱼脾脏和头肾热休克蛋白表达的检测结果.18 3.4.2 阿特拉津和毒死蜱单独及联合暴露对鲤鱼脑热休克蛋白表达的检测结果23 3.4.3 阿特拉津和毒死蜱单独及联合暴露对鲤鱼肝脏热休克蛋白表达的检测结果25 3.4.4 阿特拉津和毒死蜱单独及联合暴露对鲤鱼肾脏热休克蛋白表达影响的检测结果27 3.4.5 阿特拉津和毒死蜱单独及联合暴露对鲤鱼鳃热休克蛋白表达影响的检测结果30 4 讨论 32 4.1 鲤鱼 HSP60 、HSP70 和 HSP90 基因的克隆、表达及多克隆抗体的制备32 4.2 阿特拉津和毒死蜱亚慢性暴露对鲤鱼热休克蛋白表达的影响33 4.2.1 阿特拉津和毒死蜱亚慢性暴露对鲤鱼脾脏、头肾、脑和肝脏热休克蛋白表达的影响 33 4.2.2 阿特拉津和毒死蜱单一及联合暴露对鲤鱼肾脏和鳃中热休克蛋白表达的影响35 5 结论 37 致谢 38 参考文献 39 攻读硕士期间发表的学术论文46