金黄色葡菌球菌刺激巨噬细胞对JNK 活化和Th1Th2 型细胞因子分泌的影响.pdf

安徽医科大学学报　ＡｃｔａＵｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｉｓＭｅｄｉｃｉｎａｌｉｓＡｎｈｕｉ　２０１４Ａｐｒ；４９（４） ·４２３· ◇基础医学研究◇ 金黄色葡菌球菌刺激巨噬细胞对ＪＮＫ活化 和 Ｔｈ１／Ｔｈ２型细胞因子分泌的影响 肖文艳，方　磊，吴惠梅，丁佩山，刘荣玉 摘要　目的　探讨金黄色葡萄球菌（简称金葡菌）刺激小鼠 子又可以趋化Ｔ淋巴细胞、嗜酸性粒细胞等迁移进 巨噬细胞系ＲＡＷ２６４７对ｃＪｕｎ氨基末端激酶（ＪＮＫ）信号通 ［１］ 而导致气道持续炎症和严重损伤。研究 显示金 路活化及其对Ｔｈ１／Ｔｈ２型细胞因子表达的影响。方法　体 黄色葡萄球菌（简称金葡菌）细胞壁成分肽聚糖可 外培养小鼠单核巨噬细胞系ＲＡＷ２６４７细胞，以金葡菌的感 以通过巨噬细胞表面Ｔｏｌｌ样受体２（Ｔｏｌｌｌｉｋｅｒｅｃｅｐ 染复数 （ＭＯＩ）值为 １０（金葡菌 ∶细胞 ＝１０∶１）刺激 ｔｏｒ２，ＴＬＲ２）介导活化丝裂原活化蛋白激酶（ｍｉｔｏｇｅｎ ＲＡＷ２６４７细胞，设置时间点为０５、１０、１５、２０ｈ。Ｗｅｓｔ ａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ，ＭＡＰＫ）家族的ｃＪｕｎ氨基末 ｅｒｎｂｌｏｔ检测金葡菌刺激后 ＲＡＷ２６４７细胞 ＪＮＫ磷酸化水 端激酶（ｃＪｕｎａｍｉｎｏｔｅｒｍｉｎａｌｋｉｎａｓｅ，ＪＮＫ）信号通 平，ＥＬＩＳＡ法检测各时间点 ＲＡＷ２６４７细胞上清液中白介 素５（ＩＬ５）和干扰素（ＩＦＮ）的表达水平。结果　金葡菌 路，特别是活化ＪＮＫ信号通路能够促进巨噬细胞吞 γ γ ［２］ 刺激ＲＡＷ２６４７细胞后ＪＮＫ磷酸化水平显著升高，在０５ｈ 噬金葡菌等病原体的过程 ，并且活化的ＪＮＫ信号 最明显（Ｐ＜００１）；细胞上清液中ＩＦＮ水平在金葡菌刺激 通路能够激活下游核转录因子系统释放多种细胞因 γ 后０５、１０ｈ显著升高（Ｐ＜００１），而在１５、２０ｈ逐渐恢复 子。因此，该研究拟通过金葡菌刺激小鼠巨噬细胞 到正常水平（Ｐ＞００５）；ＩＬ５水平在金葡菌刺激后 １０ｈ时 来观察ＪＮＫ信号通路的活化及其对 ＩＬ５、ＩＮＦ炎 γ 开始升高（Ｐ＜００５），并在 １５、２０ｈ显著升高（Ｐ＜００１）； 性细胞因子分泌的影响。 另外ＩＬ５／ＩＦＮ在 １０、１５、２０ｈ时差异均有统计学意义 γ （Ｐ＜００１）。结论　金葡菌刺激小鼠巨噬细胞系ＲＡＷ２６４７ １　材料与方法 细胞能够活化ＪＮＫ通路，并影响Ｔｈ１／Ｔｈ２型细胞因子的表 １．１　实验材料　小鼠单核－巨噬细胞系ＲＡＷ２６４７ 达。 购于中国科学院上海细胞库；金葡菌 ＮＣＴＣ８３２５由 关键词　巨噬细胞；ＪＮＫ；ＩＬ５；ＩＦＮ γ 中图分类号　 Ｒ５６２２＋５；Ｑ２４１；Ｑ７４ 中国科学技术大学生命科学学院教授馈赠；ＤＭＥＭ 文献标志码 Ａ 文章编号 １０００－１４９２（２０１４）０４－０４２３－０４ 培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素均购于美国Ｉｎ ｖｉｔｒｏｇｅｎ公司；胰蛋白胨、