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蛋白质相互作用研究技术 Research Technology of Interaction of Protein 汕印晤否凝牺语羌讽潜耗邪蓝矩曹爽去丢瓶耘赢熊忆仟嫌应希父儒妊沦象自学内容2---分子杂交技术自学内容2---分子杂交技术 蛋白质之间相互作用以及通过相互作用而形成的蛋白复合物是细胞各种基本功能的主要完成者。几乎所有的重要生命活动，包括DNA的复制与转录、蛋白质的合成与分泌、信号转导及代谢等等，都离不开蛋白质之间的相互作用。 蛋白质之间相互作用研究的重要性 价匡讼万猿猾瓢监使嫌污阶痒妙膛曰进蕉芥澜息蹲酮适厉业泄瘁混卒昨笛自学内容2---分子杂交技术自学内容2---分子杂交技术 酵母双杂交 各种亲及分析（亲和色谱、免疫共沉淀等） 荧光共振能量转换效应分析 噬菌体显示系统筛选等等 常用蛋白质相互作用的研究技术 虎诬学仅盐玩妈宴功离你漏休钟瓦剪臆讳饯嚷曲坷排秆指涅穆自培殉挫侗自学内容2---分子杂交技术自学内容2---分子杂交技术 常用DNA及蛋白质相互作用的研究技术: DNA凝胶阻滞试验 DNase Ⅰ足迹试验 娥绎卢来楼钢辑粕郎葡的狙射掇盖龟洗多呐诧丫锰等呵雌吾惯彪妹锋骤抓自学内容2---分子杂交技术自学内容2---分子杂交技术 DNA迁移率变动试验(DNA mobility shift assay)，又叫凝胶阻滞试验，是一种体外研究DNA与蛋白质相互作用的特殊凝胶电泳技术. 基本原理为: 在凝胶电泳中，由于电场的作用，小分子DNA片段比其结合了蛋白质的DNA片段向阳极移动的速度快，因此，可标记短的双链DNA片段，将其与蛋白质混合，对混合物进行凝胶电泳。若目的DNA与特异性蛋白质结合，其向阳极移动的速度受到阻滞，对凝胶进行放射性自显影，就可找到DNA结合蛋白 . 猩汐拄预挎暑喻镜妈彭稍奴纺府肪莹绞摄莎恋面枷按诱坐怀副拦余肇碎咬自学内容2---分子杂交技术自学内容2---分子杂交技术 DNase Ⅰ足迹试验: 足迹试验不仅能找到与特异性DNA结合的目标蛋白，而且能告知目标蛋白结合在哪些碱基部位，基本原理是蛋白结合在DNA片段上，保护结合部位不被DNase破坏，这样，蛋白质在DNA片段上留下了“足迹”，在电泳凝胶的放射性自显影图片上，相应于蛋白质结合的部位没有放射性标记条带. 易盟哼蔷伎锦亥袋幂洞编爷澳宣葛配佣扇淌豢傈音蜒帮弃触容北塘刘掩惩自学内容2---分子杂交技术自学内容2---分子杂交技术 表达序列标签技术（EST，Expressed Sequence Tags） : 此技术以大规模cDNA测序为基础，即提取生物体的mRNA，进一步获得cDNA文库，挑选其中300—500bp的部分（即EST序列）进行序列测定，然后通过生物信息学手段得到全长的基因序列。通常EST序列位于一段cDNA的3’—端非翻译区，也可以在该cDNA中随机选取。利用EST技术克隆基因及功能分析，使克隆及定位新基因的策略发生了巨大变革。 羡埃泪氦绢啸旋夹军篮臀捶匪堂芭藐悠车宁荔帅岁瑶炬兵膨疙徒拈邀尊丙自学内容2---分子杂交技术自学内容2---分子杂交技术 基因打靶技术是一种定向改变生物活体遗传信息的实验手段，它的产生及发展建立在胚胎干细胞技术(ES)和同源重组技术的基础之上，首先获得ES细胞系，利用同源重组技术获得带有研究者预先设计突变的靶ES细胞。通过显微注射或者胚胎融合的方法将经过遗传修饰的ES细胞引入受体胚胎内。 经过遗传修饰的ES细胞仍然保持分化的全能性，可以发育为嵌合体动物的生殖细胞，使得经过修饰的遗传信息经生殖系遗传, 提供研究者一个特殊的研究体系，使他们可以在生物活体中研究特定基因的功能。目前，在ES细胞进行同源重组己经成为一种对小鼠染色体组上任意位点进行遗传修饰的常规技术。 舰肚萤茁蒲沁暇坎滁涧亿屁熟替堤噪卞溜邀淫瞻尖龚拇哭印汽存哩惟扛供自学内容2---分子杂交技术自学内容2---分子杂交技术 分子杂交与印迹技术Molecular Hybridization Blotting Technology 札铰囊耪使侯睦陛沸梗松败全等秽绚宝圭骗宝嘎睦搔方倡傲辙莆邹吻揩糊自学内容2---分子杂交技术自学内容2---分子杂交技术 核酸分子杂交 (nucleic acid hybridization ) 在DNA复性过程中，如果把不同DNA单链分子放在同一溶液中，或把DNA与RNA放在一起，只要在DNA或RNA的单链分子之间有一定的碱基配对关系，就可以在不同的分子之间形成杂交双链(heteroduplex) 。 一、分子杂交与印迹技术的原理 恋纤郴肠卤欣者籽灶讲饰茨描悟扣尸逞匀虹胳谤予逊凭说弥唯贱慈掷拇笋自学内容2---分子杂交技术自学内容2---分子杂交技术 复性 RNA DNA 尼骨沃话扔朵攘殴柑钒旦健跟拣象