Study on the extraction and immunogenicity of Polysaccharide from Staphylococcus aureus biofilm牛乳金黄色葡萄球菌生物被膜多糖的提取及其免疫原性的研究.pdfVIP

摘 要 引起奶牛乳房炎（）、食物中毒以及临床感染的关键致病菌之一是金 黄色葡萄球菌，长期以来，对该病原菌感染的治疗手段主要以抗生素为主，然而，抗 生素大量持久的使用会导致细菌耐药菌株的形成，使预防和治疗难度不断增大。牛乳 金黄色葡萄球菌耐药菌株的存在也同样给食品安全带来巨大隐患，因此，以金黄色葡 萄球菌耐药菌株生物被膜免疫原性为切入点开展研究，为探索乳源金黄色葡萄球菌耐 药菌株的快速检测方法提供依据。 本试验以牛乳中金黄色葡萄球菌耐药菌株为目标菌，研究在 TSB液体培养基中添 加不同的营养成分，通过活菌计数观察生物被膜的生长情况，从而对金黄色葡萄球菌 生物被摸的培养条件进行优化。经过培养的成熟的金黄色葡萄球菌生物被膜，采用超 声波法振荡洗脱已培养好的生物被膜，用无水乙醇沉淀法对生物被膜多糖进行了提 取，并采用加酶法、过葡聚糖纤维素柱层析法和超滤浓缩法对提取的生物被膜粗多糖 进行进一步纯化，同时用常规法（苯酚-硫酸法）测定其中多糖的含量。最后，用经 过纯化好的生物被膜多糖来免疫 小鼠，同时采用间接 法检测血清抗体 效价。 试验结果表明，金黄色葡萄球菌生物被膜在加有 ％乳糖、％和 ％胎牛 血清的液体 TSB培养基中生长力最强。用此条件培养并提取和纯化的生物被膜多糖， 其粗糖的纯度为 ﹪，精制多糖的纯度为 ﹪。核酸的含量为 ， 蛋白质的含量为 0.0247。用经过纯化的生物被膜多糖免疫 小白鼠，生 理盐水注射组作为阴性对照，测定结果显示，纯化的生物被膜多糖没产生生物被膜多 糖特异性抗体，没有刺激动物机体产生免疫应答，只是随着免疫次数的增加，值 会逐渐增高，原浓度组在三免后一周出现了最大值，最大时达到了 。初步判定生 物被膜多糖这类小分子物质是半抗原物质，是非 细胞依赖性抗原，作用于动物机体 后未出现明显的免疫应答。 关键词：金黄色葡萄球菌；耐药菌株；生物被膜多糖；纯化；免疫原性 Abstract