10005微生物限度检查操作规程.docVIP

文件名称 微生物限度检查操作规程 文件编号 QB-WI/10-005-00 版本号 00 页码 制 定 人 制定日期 2017.03.08 审 核 人 审核日期 批 准 人 批准日期 生效日期 管理部门 质量部 分发部门 总经理□ 技术部□ 质量部□ 生产部□ 管理者代表□ 商务部□ 销售部□ 行政部□ 仓库□ 序号 修订原因及目的 修订内容 01 文件新建 / 文件名称 微生物限度检查操作规程 文件编号 QB-WI/10-005-00 版 本 号 00 页 码 1. 目的 规范微生物限度检查方法及操作，使纯化水、内包材、环境监测、清洁验证及其他要素的微限 检查符合ChP2015规定。 2. 适用范围 适用于纯化水、内包材、环境监测及其他要素的微限检查。 3. 引用/参考文件 ChP2015 实用药品微生物检验检测技术指南 《取样及留样管理规程》 4. 职责 质量控制实验室负责执行对相关要素的微限检查，QA负责执行监督并参与OOS调查。 5. 程序 5.1 仪器用具 高压蒸汽灭菌锅、洁净工作台、生化培养箱、霉菌培养箱、三角瓶、培养皿、胶塞、移液枪、微型台秤或电子天平、微限检查虑架、酒精灯、镊子、0.22μm 滤膜等。 5.2培养基、稀释液及试剂（均已经121℃，15min灭菌处理） 胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）、沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）、pH7.0 NaCl-蛋白胨缓冲液、无菌生理盐水、R2A琼脂培养基、胰酪大豆胨液体培养基（TSB）、麦康凯琼脂培养基、麦康凯液体培养基等。 5.3 检查 5.3.1 纯化水微生物限度检查 5.3.1.1 样品准备 微生物QC手用75%酒精消毒后，将采样口周围进行消毒，打开采样口阀门使水自流至少5秒后用灭菌三角瓶或者无菌取样袋快速取样至少10ml。打开阀门后在需要时仍可以使用消毒剂进行再次消毒后取样。取样结束后，迅速用胶塞将三角瓶封口，装于取样箱内转移至微生物实验室进行检验，样品转移过程中特别注意污染防护。样品如不能立即检测，可以在2-8℃条件下最长保存8h。 5.3.1.2 实验室准备 实验前将相关试剂、仪器、设备、耗材等转移进超净工作台或者传递窗内，开启实验室与超净台送风，调节超净台风速达到0.36-0.54m/s后开启超净台、微限室、更衣间、缓冲间、传递窗紫外灯，保持30min。 5.3.1.3 微限检查操作 微生物QC按照《人员进出洁净区管理规程》进行更衣、消毒后进入实验室关闭紫外灯后准备开始试验。点燃酒精灯，使用酒精棉将虑架过火冷却后安装滤芯、滤膜和虑杯。三联虑架启用两只，分别向两只虑杯内移入1ml纯化水后各加入100ml pH7.0 NaCl-蛋白胨缓冲液或无菌生理盐水启动真空泵进行抽滤。抽滤结束后，不锈钢镊子在酒精灯火焰上过火冷却后将滤膜夹下，正面朝上平铺于R2A琼脂培养基上。R2A琼脂培养基于30-35℃生化培养箱中倒置培养120h后计数。虑杯为一次性虑杯，滤芯在进行后续样品检测之前应过火灼烧灭菌后才允许使用，检测结束后应将阴性对照一同培养。纯化水微限上限为100cfu/ml。 5.3.2内包材微限检查 5.3.2.1 样品制备 铝箔纸到货后，选取一卷铝箔纸转移进生产车间清洁后除去外包装后按照《物料进出洁净区管理规程》转移进洁净区内。微生物QC按照《人员进出洁净区管理规程》进入洁净区后用灭菌剪刀剪开铝箔纸密封袋，用内开孔面积为100cm2的取样模具，每个棉签擦拭5次，用2个棉签共擦拭10次，每卷铝箔选取三个位置。三个位置的取样总面积为 300cm2。每支棉球擦拭后立即投入盛30mL无菌生理水的三角瓶中并封好瓶盖。样品在检验前剧烈振摇，禁止超声处理。取样段应剪断废弃。 5.3.2.2 实验室准备 实验前将相关试剂、仪器、设备、耗材等转移进超净工作台或者传递窗内，开启实验室与超净台送风，调节超净台风速达到0.36-0.54m/s后开启超净台、微限室、更衣间、缓冲间、阳性室、传递窗紫外灯，保持30min。 5.3.2.3 内包材微限检查 微生物QC按照《人员进出洁净区管理规程》进行更衣、消毒后进入微限室关闭紫外灯后准备开始试验。点燃酒精灯，使用酒精棉将虑架过火冷却后安装滤芯、滤膜和虑杯。三联虑架启用两只，分别向两只虑杯内移入10ml供试液后各加入100ml pH7.0 NaCl-蛋白胨缓冲液或无菌生理盐水启动真空泵进行抽滤。抽滤结束后，不锈