2017年秋高中生物 DNA和蛋白质技术 5.1 DNA的粗提取与鉴定课件1 新人教版选修1.pptVIP

DNA粗提取与鉴定 1、DNA分子由两条链组成,这两条链按反向平行的方式盘旋成双螺旋结构. 2、DNA分子中的磷酸和脱氧核糖交替连接.排列在外侧,构成基本骨架,碱基排列在内侧. 3、DNA分子两条链上的碱基通过氢键连接成碱基对.(原则) ①根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下，DNA的溶解度最小？ DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？ DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图 在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。 ②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？ 当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L时，DNA的溶解度较大，浓度为 0．14 mol／L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出。 2、 DNA对酶、高温、洗涤剂的耐受性 3、DNA遇二苯胺（沸水浴）会变成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 1、DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以提取出含杂质较少的DNA。 实 验 过 程 二、DNA的释放 一、材料的选定 三、DNA与蛋白质等分离 四、DNA的析出、获取、鉴定 一、材料的选定 1、 DNA含量是否较高？ 2、材料是否好取材？ 3、是否容易提取DNA（ 植 / 动 ）？ 1、怎样使鸡血细胞破裂？原理是什么？ 2、如果实验材料是植物细胞又该如何处理？ 3、加洗涤剂和食盐的作用是什么？ 4、提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加 入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的 搅拌和研磨。如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？ 二、DNA的释放 1、获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？ 2、为了纯化提取的DNA需要将滤液作怎样的进一步处理？ 3、为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？ 4、方案二和方案三的原理有什么不同？ 三、DNA与蛋白质等物质分离 2、如何鉴定DNA分子？还可以用什么物质来鉴定？ 1、纯的DNA应该是什么颜色？ 四、DNA的析出、鉴定 1.制鸡血细胞液（活鸡鲜血经分离或沉淀获得） 柠檬酸钠100mL 活鸡鲜血180mL 玻棒搅拌，离心、分离或静置沉淀。除去血液中的上清液,即血浆 2.提取DNA ①取血细胞5-10mL＋20mL蒸馏水，用玻棒沿一个方向快速搅拌。 ②纱布过滤：滤液中含DNA和其他核物质，如蛋白质。 ⑴.提取血细胞核物质 ⑵.溶解核内的DNA 滤液＋2mol/L的NaCl溶液40mL，玻棒沿一个方向轻缓搅拌。 实验步骤 ⑶.析出含DNA的粘稠物 ⑷.滤取含DNA的粘稠物 ⑸. DNA粘稠物的再溶解 在上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并沿一个方向轻轻搅拌，出现丝状物；当丝状物不在增加时，停止加水（此时NaCl溶液的浓度相当于0.14mol/L）。 用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上。 20mL2mol/L的NaCl溶液 步骤⑷含DNA的粘稠物 在20mL烧杯中轻缓搅拌3min，使尽可能多的DNA溶解在NaCl溶液。 ⑹.过滤含有DNA的NaCl溶液 用放有两层纱布的漏斗过滤步骤⑸所得的溶液，滤液中含有DNA。 ⑺.提取含有杂质较少的DNA 步骤⑹所得的滤液＋体积分数为95%的冷却酒精50mL，用玻棒沿一个方向轻缓搅拌，溶液中（析出）出现乳白色丝状物，用玻棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。 3.DNA的鉴定 加入二苯胺试剂4mL，用玻棒搅拌使DNA溶解，沸水浴5min，观察溶液是否出现蓝色。 1.共有“三次过滤，两次析出，七次搅拌” 2.加入“两次蒸馏水，三次NaCl溶液，一次酒精” 三、实验小结 方法步骤 加入物质 目的 1 . 制备鸡血细胞液 柠檬酸钠溶液 ① 2 . 提取鸡血细胞细胞核物质 20 m1 蒸馏水 ② 3 . 溶解细胞核内的 DNA 2 m1 ／ L 的 NaCI 溶液 40 mL ③ 4 . 析出含 DNA 的黏稠物 蒸馏水 ④ 5 . 滤取含 DNA 的黏稠物 ⑤ 6 . 将 DNA 的黏稠物再溶解 2 mol ／ L 的 NaCl 溶液 20 mL ⑥ 7 . 过滤含 DNA 的 NaC l 溶液 ⑦ 8 . 提取含有杂质较少的 DNA 冷却的 95 ％的酒精 50 mL ⑧ A : (1) 向试管中加入 0 . 015 mol ／ L 的 NaCl 溶液 5 mL (2) 加入 D