龙芩草喷雾剂对大鼠离体肺泡Ⅱ型上皮细胞的作用机理研究.pdfVIP

中文摘要 龙芩草喷雾剂对大鼠离体肺泡Ⅱ型上皮细胞的作用机理研究 中文摘要 肺泡II型上皮细胞是肺内的重要结构细胞，它作为肺泡干细胞能增殖分化为肺泡I 型上皮细胞，在肺损伤后肺泡上皮的修复与更新过程中有重要意义。 肺泡II型上皮细胞体外损伤模型，在独立环境下观察肺泡Ⅱ型上皮细胞在增殖和分泌功 能方面的损伤情况。同时应用已在临床证明能辅助治疗和预防感染性急性肺损伤的龙芩 草喷雾荆进行干预，探讨此复方的作用机理。 方法： 第一部分：按照Dobbs等提供的方法并适当改进分离大鼠肺泡II型上皮细胞，用IgG 免疫粘附的方法纯化分离的细胞，细胞鉴定采取鞣酸染色和AKP方法。 第二部分：应用体外培养的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞，观察脂多糖对其分泌功能及 sP“、SP-B及AQPlmRNA表达的影响，同时进行龙芩草喷雾剂干预观察药物的作用。通 过酶联免疫吸附法测定细胞培养上清液中TNF-a和IL一8水平变化，运用FQ-PCR方法观 察肺泡Ⅱ型上皮细胞中sP—A，SP—B和AQPlmRNA表达的改变。 结果： 1．大鼠肺泡II型上皮细胞分离、纯化和鉴定：通过计数，纯化前可得约109个／只数 量的细胞，IgG免疫粘附纯化后约为107个／只。台盼兰染色细胞活力为96％以上。通过 鞣酸染色及AKP染色鉴定大鼠肺泡II型上皮细胞并进行细胞纯度判断，未纯化时，纯度 达74．5±13．8％，纯化后可提高至90．4±2．6％； 小时，LPS可导致体外培养肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤，表现为肺泡Ⅱ型上皮细胞坏死和凋 亡发生率增高； 3．LPS损伤后的肺泡II型上皮细胞培养上清液中TNF-ct含量明显增加，加药后可抑 制TNF_o【的异常增加；IL-8含量略有增加，但没有明显差异； 剂干预后sP—A和AQP一1表达回升P0．001。 结论： 1．大鼠肺泡II型上皮细胞的分离、纯化和鉴定：适当的消化酶浓度、时间可提高分 离细胞的活力，细胞分离后用IgG免疫粘附方法纯化可使纯度提高15％，鞣酸染色和AKP 鉴定可见II型细胞上的特征性板层小体。 2．脂多糖单独作用于体外培养的肺泡II型上皮细胞可直接损伤细胞，表现为抑制其 显下降，抑制肺泡II型上皮细胞分泌表面活性蛋白和水通道蛋白的功能。 3．龙芩草喷雾剂干预后这些损伤情况均得到明显改善，提示此龙芩草喷雾剂在临床 ．2． 龙芩草喷雾剂对大鼠离体肺泡I【型上皮细胞的作用机理研究 上对急性肺损伤的治疗有效，其对肺泡Ⅱ型上皮细胞的保护作用是机理之一。 关键词：表面活性蛋白，肺泡Ⅱ型上皮细胞，肺水转运，急性肺损伤，龙 芩草喷雾剂，炎性因子，脂多糖 英文摘要 abstract II II Alveohr slructure ceilsthat type cells(ATs)are Iinethealveolar important sBrface． actasthestemcellforthealveolar to and fLlrther They differentiate epithelium into proliferate I a in typecells，andcriticalrolethe play repair