当前规模化猪场产房初生仔猪腹泻病原、病因和防控思考.pdfVIP

114 养猪 SWINEPRODUCTION (5) 2014 当前规模化猪场产房初生仔猪腹泻病原、病因和防控思考 胡巧云 ，喻正军 ，汪 雪 ，陈基萍 ，李 聪 (1广西壮族 自治区动物疫病预防控制中心，广西 南宁 530000；2．广西扬翔地方猪创新研究院，贵港 537100) 中图分类号：$858．28 文献标志码 ：A 文章编号：1002—1957(2014)05一O114—05 自2010年 以来，产房初生仔猪腹泻已经持续 1000mL蒸馏水，充分摇匀后 l16℃高压蒸气灭菌 发生了多年，其时间之长、地域跨度之大和死亡率之 15min，水浴冷却至60℃，按 6％比例加入无支原体 高给业界造成了严重 的经济损失 lJ【，导致很多规模 牛血清，再加入 0．6％过滤除菌的I％NAD，充分摇匀 化养猪场常年处于亏损的状态，企业老板、经理人和 后倒入平皿。 员工 “谈泻色变”。 1．3-2 麦康凯培养基 准确称取麦康凯琼脂55g，加 从2013年底开始，美国许多州陆续发生腹泻， 入 1000mL蒸馏水，充分摇匀后 116cC高压蒸气灭 截至2014年4月，共波及28个州，仔猪死亡高达 菌20min，水浴冷却至 60℃，充分摇匀后倒入平皿。 600万之多，给美国乃至世界养猪业带来了沉重的 2 试验方法 负担，欧盟甚至规定暂时禁止从美国进 口猪肉。据 2．1 病原 的检测 有关数据统计，美国目前 已有超过57％的母猪场发 运用PCR法检测 圆环病毒 2型和伪狂犬病病 生了流行性腹泻。 毒，RT—PCR法检测蓝耳病病毒、猪瘟病毒、传染性 面对腹泻的肆虐，广西壮族 自治区动物疫病预 胃肠炎病毒、流行性腹泻病毒、轮状病毒、库布病毒 防控制中心同扬翔地方猪研究院合作，数年来不间 和博卡病毒，引物略。 断地对临床上产房仔猪腹泻的样品进行检测，并根 2．2 病原茵的分离、鉴定和培养 据检测结果对发病猪场进行各种防控和治疗方式的 分离：无菌操作，从猪肺脏 、脾脏、肾脏 、淋巴 探索。 结、腿关节和脑组织等病料中取样 ，于加有 NAD的 1 试验材料 TSA固体培养基上划线培养 ，37℃恒温培养箱培 1．1 样品来源 养 8～72h。 2011年 12月至2014年4月，由广西多个县市 鉴定：挑取单个菌落 的 1／2做触酶试验 ，剩下 规模养猪场提供的共200多份腹泻样品。 的 1／2按常规革兰 氏染色法染色后用光学显微镜 1．2 主要试剂 观察。 总RNA抽提试剂Trizol：购 白Invitrogen公司； 培养：挑取单个菌落划线接种于麦康凯培养 M—MLV反转录酶、RNase抑制剂、dNTPs、rTaq：购 自 基上，37cC恒温培养箱培养 8～72h，观察培养 TaKaRa；猪瘟抗原检测试剂盒和伪狂犬病野毒抗体 结果 。 检测试剂盒：购 自美国爱德士生物科技公司。 2．3 脐带血的采集和检测 胰蛋 白胨大豆琼脂 (TryptoneSoyaAgar，TSA) 取干净的青霉素瓶，灭菌烘干后备用；将初生小 和胰蛋白胨大豆肉汤 (TSB)：购 自美国Becton，Dick— 猪的脐‘‘带血’，尽可能多地挤到备用的青霉素瓶中，4qc insonandC0mpanv；麦康凯琼脂：购 自中国检验检疫 保存送至实验室待检。按常规的抽提方法I2_抽提 局科学研究院北京路桥技术有限责任公司；革兰氏 DNA和RNA模板后，采用相应的PCR和RT—PCR 染色液：购 白杭州天和微生物试剂公司；无支原体牛 方法进行检测。 血清：购 自杭州四季青公司；烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 2．4 腹泻防控方案 (NAD)：购 自中国医药 (集团)上海化学试剂公司。 2．4．1 机械清理、消毒