弓形虫微线体蛋白MIC2和M2AP真核表达载体的构建.pdfVIP

中 国 病 原 生 物 学 杂 志 2014年 9月 第 9卷第 9期 · 82O · JournalofPathogenBiology September2014，Vo1．9，No．9 DOI：10．13350／j．cjpb．140913 论著 弓形虫微线体蛋 白MIC2和 M2AP真核表达载体的构建* 谢彬彬 ，章庆伟 ，陈亲芬 ，白炳君 ，林季 ，刘文权 ，梁韶晖一 (温州 医科大学基础医学院寄生虫学教研室 ，浙江温州 325035) 【摘要】 目的 构建 弓形虫 RH株微线体蛋 白M2AP和 MIC2的真核表达载 pGAPZaA-mic2和 pGAPZaA—m2ap，为建 立 同时表达 MIC2和 M2AP蛋 白的重组毕赤酵母表达系统，制备重组粘 附蛋 白复合体 MIC2一M2AP奠定基础 。 方法 提取 弓形虫 RH株速殖子总 RNA，用 OligodT—Adaptor引物逆转录合成 cDNA。根据 已知的 弓形虫 mie2和m2ap基因 序列 ，采用引物设计软件 Primerpremier5．0自行设计并合成引物 ，以 cDNA 为模板 ，PCR扩增 mic2和 m2ap基 因，克 隆 人 pMD-19一simple—T载体 ，经酶切和测序鉴定后 回收 目的片段 ，分别插入至 pGAPZaA 内，构建重组毕赤酵母表达载体 pGAPZaA-mic2和 pGAPZaA—m2ap，转化入 E．coliDH5a。提取转化菌质粒 ，进行酶切和测序鉴定 。 结果 PCR扩 增得到的mic2和 m2ap基因分别为 2200bp和 1000bp，与预期大小一致 。T—A克隆重组质粒 pMD19-T—mic2、pMD19一 T—m2ap和重组酵母表达质粒 pGAPZaA-mic2、pGAPZaA—m2ap经测序鉴定，与 GenBank收录 的弓形虫 mic2基 因和 m2ap基因序列 同源性为 100 ，重组毕赤酵母表达载体 pGAPZaA-mic2和 pGAPZaA-m2ap构建成功 。 结论 成功 构建弓形虫重组毕赤酵母表达载体 pGAPZaA-mic2和 pGAPZ~A—m2ap，为进一步研究 MIC2和 M2AP相互作用机制及 其免疫保护效应奠定了基础。 【关键词】 刚地 弓形虫 ；MIC2；M2AP；真核表达 【中图分类号】 R382．5 【文献标识码】 A 【文章编号】 1673—5234(2014)09—0820—04 [JournalofPathogenBiology．2014Sep；9(9)：820—823．] Constructionofeukaryoticexpressionvectorsforthemicronemepmteim MIC2andIVI2APToxoplasmagondii XIEBin—bin，ZHANG Qing—wei，CHEN Qin—fen，BAIBing—jun，LIN Ji，LIU Wen—quan，LIANG Shao—hui (WenzhouMedicalUniversity，Wenzhou，Zhejiang325035，China) [Abstract] 0bjective ToconstructtheeukaryoticexpressionvectorspGAPZaA-mic2andpGAPZaA-m2apinaPichia pastorissystem tostudythefunctionsofthemicronemeproteinsM IC2andM2AP oftheRH strainofToxoplasmagon— dii M ethods TotalRNA wasextractedfrom thetachyzoitesoftheRH strainofT．gondiiusingaTrizolKit．mic2and m2apcDNA wasreverse—t