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基 础 科 学 中国畜牧兽医文摘 2014年 30卷 第8期 弓形虫病诊断技术及检测 李继林’ 许保军 (1_江苏省盱眙县古桑乡畜牧兽医站，江苏淮安 211701； 2．江苏省盱眙县桂五镇畜牧兽医站，江苏淮安 211721) 弓形虫病是由原生动物寄生虫刚地弓形虫引起的一种人兽共 的血清。阳性样品会凝集并可评出级别，而阴性样品则会在孔底 患性动物传染病。刚地弓形虫 (简称弓形虫)是一种人兽共患、 部产生一个析出的速殖子 “钮扣”。尽管该试验需要较多的抗 专性细胞内原生动物寄生虫；它对所有温血动物都有感染 。 原，但是它简单且易于操作。市场上有商品试剂盒。后面介绍弓 1 病原鉴定 形虫的培养和收获方法。市场上也有商品LAT试剂盒。DAT和LAT 1．1 病原分离 没有种特异性，适用于各种动物。 用接种实验鼠的方法可以很好地将弓形虫从流产绵羊和山羊 最初使用是由弓形虫RH株速殖子制备的可溶性抗原，置于微 的胎儿及胎膜中分离出来。最好的接种材料是胎儿脑组织和胎盘 量板孔中。待检血清 (如采 自绵羊)加进后，再加抗物种标记酶 子叶，用无污染的新鲜样品可得到很好的实验结果。任何时候都 轭合物如过氧化酶标记的抗绵羊IgG。任何粘附的轭合物都引起底 不能将样品冰冻，因为这样会杀死该寄生虫。 物变色，·底物颜色变化与直接结合的抗体量有关，并可用分光光 1．2 组织切片 度计在对应于所用底物吸收值下判读。该试验简便，可检测大数 在死于急性 弓形虫病的动物中，许多组织包括肝、心和肺脏 量样品，而且用所选种特异性轭合物 ，操作容易。种特异性轭合 有局灶性单核炎症或伴局部坏死。肺脏有时有水肿。淋巴结有时 物、底物和全套试剂盒均可在市场买到。但该试验需要分光光度 肿大，可伴有出血性或非出血性坏死。尤其在坏死区与炎症区可 计 。 检出弓形虫速殖子。 · 需要分析大量样品的实验室很适合使用ELISA。近年来，一 1．3 饮水中卵囊检测 种动力学ELISA (KELA)已经被建立。KELA系统测定结合酶和 利用检测隐孢子虫卵囊的方法，已经在饮水中检出了弓形虫 产生颜色的底物溶液之间的反应率。以每45s读一次阅读3种光密 卵囊。该方法需要采集大体积的水样并将水样通过柱状滤器。鉴 度 (OD) (利用KELA数据管理程序)，以斜率 (slope)方式显 别弓形虫卵囊的方法是接种裂齿动物。 示出结果。ELISA和KELA之间的相关性非常高，因此，这2个试 2 血清学试验 验都是非常好的诊断工具，只是它们应用的方便性不同。 有多种血清试验可用于检测 弓形虫抗体。 (1)观察者是在 为了提高常规ELISA的特异性，使用重组抗原及亲和纯化的 显微镜下判断速殖子 出现的颜色。例如，染色试验 (DT)或IFA 弓形虫特异抗原的ELISA试验已经被建立，可用于绵羊检测。但 试验。 (2)根据速殖子、血红细胞或胶乳颗粒的凝集原理建立 这些试验没有被常规应用。 起来的试验，例如，与它们对应的直接凝集试验、间接血凝试验 以常规ELISA对弓形虫特异抗体IgG和IgM的检测会出现急性 (IHA)和胶乳凝集试验。ELISA是依据颜色变化的程度来界定一 和慢性 弓形虫之间的差异 。目前，已经建立起亲合力试验。由于 定溶液中特异性抗体的数量。 免疫应答发育成熟，所以，抗原的增加亲合力 (功能性亲合力 ) 2．1 DT是人弓形虫血清学试验的所谓 “金标准” 抗体在感染发生之后产生。这种亲和力可以被检测出来，并可用 将活弓形虫速殖子加补体样辅助因子和加待检血清在37℃孵 于确定 弓形虫感染是活跃期还是初期。一种检测绵羊弓形虫P抗 育1h